Este protocolo es uno de los protocolos de trasplante pulmonar más sencillos para modelos de animales grandes y proporciona el mayor detalle en términos de manejo quirúrgico. Las principales ventajas de esta técnica son la descripción de la cirugía, la evaluación de la función pulmonar izquierda aislada después del trasplante y la estabilización del cerdo durante la cirugía. El método es beneficioso en la investigación de profusión pulmonar ex-situ para validar los hallazgos ex-situ con un modelo de trasplante de reperfusión in vivo.
El modelo de reperfusión in vivo del trasplante de pulmón es beneficioso para probar los hallazgos de profusión pulmonar ex situ y también podría usarse en pruebas de órganos artificiales, como pulmones mecánicos o de bioingeniería. Comience colocando al cerdo en una posición de decúbito lateral derecho para la toracotomía lateral anterior izquierda. A continuación, identifique la punta de la escápula izquierda en la apófisis xifoides, inferior al esternón con palpación, y conecte los dos puntos identificados para marcar el sitio de incisión de la toracotomía de 20 centímetros de largo.
Después de inducir la anestesia, use un bisturí para hacer una incisión en la piel y luego use electrocauterio para diseccionar las capas subcutáneas y las capas musculares del animal. El dorsal ancho debe dividirse. Después de identificar la costilla inmediatamente debajo de la incisión, cauterice en la parte superior de la costilla para exponer los músculos intercostales y evitar el haz neurovascular intercostal.
Use un hemostático de mosquito para perforar los músculos intercostales inmediatamente por encima de la costilla y luego palpe el interior del pecho en busca de adherencias con un dedo. Mientras se cauteriza el borde superior de la costilla, empuje el pulmón con una succión Yankauer para extender la toracotomía anteriormente hasta una pulgada del esternón y posteriormente a los músculos paraespinales. Al insertar un retractor esternal de Cooley, abra la toracotomía de 10 centímetros de ancho para retraer el pulmón y exponer la vena hemiácigos izquierda.
Utilice unas tijeras Metzenbaum y una parte inferior fina para diseccionar circunferencialmente la vena hemiácigos izquierda. Rodeando el vaso con lazos de seda, ligar y seccionar la vena. Disecciona la arteria pulmonar izquierda, o PA, y las venas pulmonares izquierdas, o VP, antes de rodear las venas con las corbatas de seda.
Después de cinco minutos de administración de heparina, pinzar el PA con una pinza cruzada DeBakey, el PV anterior izquierdo con una pinza Satinsky y el bronquio izquierdo con pinza Spoon Pots. Transectar la AP, la VP inferior izquierda y el bronquio izquierdo dejando al menos 0,5 centímetros de manguito de tejido. Después de dividir el ligamento pulmonar inferior izquierdo, extirpe el pulmón izquierdo.
Para el trasplante, inserte el pulmón del donante en el tórax del receptor, comenzando por el lóbulo inferior sin forzar el pulmón en el lugar. A continuación, realice la anastomosis bronquial utilizando una sutura de Prolene 4.0 en una aguja TF. Para evaluar la anastomosis bronquial en las secreciones de succión, realice una broncoscopia del pulmón izquierdo y derecho insertando un broncoscopio en el tubo endotraqueal mediante una conexión adaptadora, luego conecte el endoscopio a la succión antes de avanzar el broncoscopio hacia el bronquio izquierdo.
Observar la respiración pulmonar e inspeccionar los signos vitales en la anastomosis bronquial. Repite el proceso en el lado derecho. A continuación, utilice una sutura de Prolene 6.0 en agujas BV-1 para realizar una anastomosis de extremo a extremo de la aurícula izquierda o LA seguida de un recorte del exceso de tejido.
Después de incorporar los SVP del donante en la anastomosis inferior de VP y LA, completar la anastomosis de PA con una sutura de Prolene 6.0 en agujas BV-1 utilizando una anastomosis de extremo a extremo en funcionamiento. Posteriormente, confirmar la heparinización y administrar un cambio de potasio al animal. A continuación, abra parcialmente la pinza PA para desairear y dejar que la sangre fluya a través de la línea de sutura.
A continuación, suelte la pinza LA y deje que la línea de sutura vuelva a sangrar para liberar aún más el aire atrapado. Ate el LA y luego retire la abrazadera PA por completo. Una vez hecho esto, retire la pinza bronquial y aumente los volúmenes corrientes hasta alcanzar los 10 mililitros por kilogramo.
Después de insertar un tubo torácico maleable de 20 franceses, cierre la toracotomía en tres capas. Con unas tijeras Metzenbaum, abra la pleura izquierda para tomar muestras de sangre del lóbulo inferior izquierdo. Abra la pleura derecha para diseccionar la arteria pulmonar derecha.
A continuación, coloque una pinza para detener la perfusión del pulmón derecho. Dirija una aguja de calibre 21 hacia las venas pulmonares izquierdas y lejos de la aurícula izquierda común para tomar una muestra de sangre de la anastomosis LA para evaluar la función pulmonar izquierda. Después del pinzamiento, tome las muestras de sangre de la anastomosis PV izquierda con una aguja de calibre 21 dirigida hacia el pulmón izquierdo.
El análisis representativo indica cambios típicos en la relación de PF y formación de edema durante el protocolo de trasplante pulmonar. En la reperfusión, las proporciones de PF se redujeron en aproximadamente 100 milímetros de mercurio, ya que el pulmón izquierdo no fue inmediatamente efectivo en la oxigenación. En la evaluación aislada del pulmón izquierdo a las cuatro horas, el cociente de PF se mantuvo estable.
En un trasplante exitoso, el pulmón izquierdo podría experimentar un aumento de peso de aproximadamente 20% a 50% debido a la sangre residual en la circulación. A las 12 horas del trasplante de pulmón izquierdo, se realizó la gasometría. Se observó que el nivel de potasio se incrementó durante 60 a 120 minutos de reperfusión.
Se requirieron aproximadamente de dos a cuatro turnos durante cuatro horas de reperfusión para mantener el potasio por debajo de cinco milimoles por litro. En lugar de suturar las venas pulmonares superiores del receptor, las pinzas de mordida laterales se pueden usar para el control vascular y los vasos se pueden coser fácilmente.
