El mecanismo subyacente a CRPS I sigue sin estar claro. Establecer un modelo animal preclínico que miite el CRPS I será crucial para explorar los mecanismos subyacentes a CRPS I.El modelo CPIP de rata exhibe muchos CRPS I como simitance, que incluyen edema de la extremidad posterior e hiperemia en la etapa temprana. Después del establecimiento del modelo, seguido de hipersensibilidades térmicas y mecánicas persistentes.
Comience por anestesiar a todas las ratas con fenobarbital sódico. Asegúrese de que las ratas estén correctamente anestesiadas pellizcando su pata trasera o cola con fórceps. Y coloca la pomada veterinaria en los ojos.
Mantenga a la rata en una almohadilla calentada de 37 grados Celsius durante el procedimiento. Lubricar la pata trasera derecha y el tobillo con glicerol. A continuación, deslice un anillo de nitrilo 70 durómetro O en el lado más grande de un tubo de un punto de cinco mililitros con la tapa de presión cortada.
Inserte cuidadosamente la pata trasera en el tubo hueco hasta que llegue a la parte inferior. Deslice gradualmente el anillo O del tubo hacia la extremidad posterior derecha cerca de la articulación del tobillo. Y déjalo ahí por tres horas.
Aplicar el mismo tratamiento al grupo falso de ratas, excepto con un anillo O roto que no debe inducir isquemia. Después de tres horas, corta el anillo O y monitorea a la rata hasta que recupere la conciencia suficiente para mantener la reclinación esternal. No coloque la rata en compañía de otras ratas hasta que esté completamente recuperada de la anestesia.
Coloque la rata en una cámara de plexiglás transparente en un piso de malla, y habituar a la rata al medio ambiente durante 30 minutos antes de cualquier prueba de comportamiento. Utilice filamentos von frey para probar la rata en busca de alodinia mecánica. Comience la prueba desde el filamento medio aplicándolo verticalmente a la superficie plantar media de la pata trasera.
Aplique la fuerza adecuada para doblar el filamento durante un máximo de cinco segundos. Una retracción repentina de la pata se considera un comportamiento nocifensivo. Realice la prueba de alodinia mecánica en los días tres, dos, uno y cada dos días hasta el día 13.
Aplique el método de prueba arriba hacia abajo para probar el umbral y un método dickson para calcular el umbral de retirada de la pata del 50 por ciento. Para probar la hiperalgesia térmica, utilice el método hargreaves apuntando directamente el haz de luz emitido desde una bombilla de 50 vatios a la pata trasera. Mida la latencia de retirada de la pata, estableciendo 20 segundos como umbral de corte para evitar lesiones excesivas.
Repita cada prueba tres veces en intervalos de cinco minutos para cada pata trasera, y tome el promedio como latencia de retirada de la pata. Realice la prueba de hiperalgesia térmica en los días tres, dos, uno y cada dos días hasta el día 13. Para probar el comportamiento nocifensivo agudo inducido por capsaicina, preparar la solución de 200 cápsulas de capsaicina milimolar con DMSO, y diluir aún más uno a 1,000 en PBS para inyección.
La capsaicina es un reactivo, que puede causar irritación articular en la piel, los ojos y la respiración. Es importante usar una máscara y gafas al preparar la solución de capsaicina. A continuación, inyecte 50 microlitros de la capsaicina o un vehículo en la pata trasera con una aguja de calibre 30 unida a una jeringa de un mililitro.
Grabe el comportamiento nocifensivo, como lamer, morder o esmerzar la pata inyectada con una cámara de video durante 10 minutos después de la inyección. Evalúe el edema de pata trasera midiendo el aumento en el diámetro de la pata a 15 minutos, 24 horas, 48 horas y 72 horas después del establecimiento del modelo. Después de colocar el anillo O en el tobillo, la piel ipsilateral de la pata trasera mostró cianosis, una indicación de hipoxia tisular.
Después de cortar el anillo O, la pata comenzó a llenarse de sangre y mostró una hinchazón robusta, lo que indica una hiperemia intensa. La hinchazón disminuyó gradualmente y volvió a la normalidad 48 horas después del procedimiento. Un día después del establecimiento del modelo, la pata trasera ipsilateral del grupo CPIP exhibió alodinia mecánica obvia que persistió durante 13 días del período de tiempo de observación.
La pata trasera contralateral del grupo CPIP también mostró hiperalgesia mecánica durante 13 días. Cuando se midió la hiperalgesia térmica, las patas traseras bilaterales de ratas CPIP mostraron una latencia de abstinencia significativamente menor en respuesta a estímulos térmicos nocivos, en comparación con las ratas del grupo falso. La hiperalgesia térmica de la pata trasera ipsilateral persistió hasta el final del marco de tiempo de observación, mientras que la hiperalgesia térmica de la pata trasera contralateral duró siete días.
Los grupos falsos y CPIP se analizaron para detectar el comportamiento nocifensivo con la inyección de capsaicina. Cuando se inyectó un vehículo, el grupo falso mostró una ligera respuesta nocifensiva y el grupo CPIP mostró una respuesta significativamente mayor. Más importante aún, ratas CPIP mostraron respuestas significativamente más altas a la inyección de capsaicina que el grupo falso, lo que sugiere que las ratas CPIP exhiben un fenómeno similar a los pacientes humanos con CRPS I.By este procedimiento, las ratas son anestesiadas antes y durante el establecimiento modelo.
El modelo de rata CPIP descrito en este protocolo establecido por isquemia y CRPS I humano como simitance. Familias de estos modelos, más mecanismo sobre CRPS I se puede explorar.
