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Biochemistry

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Nanyang Technological University

Producción, cristalización y determinación de la estructura del dominio vinculante iKK de NEMO

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Describimos los protocolos para la determinación de la estructura del dominio de unión IKK de NEMO por cristalografía de rayos X. Los métodos incluyen la expresión de proteínas, purificación y caracterización, así como estrategias para la optimización exitosa del cristal y la determinación de la estructura de la proteína en su forma no unida.

Capítulos en este video

0:04

Title

1:12

Large Scale Expression of Histidine-6 (His6)-Tagged Nuclear Factor-kappa-B Essential Modulator Crystallography Construct (NEMO-EEAA)

2:33

His6-Tagged NEMO-EEAA Purification

4:42

His6 Tag Cleavage and Purification

7:09

Sparse Matrix Screening

8:23

Seed Stock Generation

9:00

Crystal Looping

9:43

X-Ray Data Processing and Structure Solution

10:38

Results: Representative Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-Binding Domain of NEMO

12:28

Conclusion

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