Un modelo animal producible es muy importante para la investigación de la infección ósea. Sin embargo, actualmente no existe un modelo de conejo para el que el estado de las infecciones y el número de bacterias es consistente. Nuestro modelo de conejo infección ósea utiliza una bacteria consistente y es tratado por sulfato de calcio cargado de vancomicina y fragmentos autógenos.
La técnica podría extenderse hacia el diagnóstico de infección ósea y terapia ósea no uníndina, y para entender la patogénesis de la infección ósea. Este método podría proporcionar información sobre otros modelos de infección ósea en ratas, ratones y cerdos. Es difícil cargar el mismo volumen de suspensión bacteriana en la médula ósea.
La demostración visual puede ayudar a los investigadores a llevar a cabo los pasos críticos de forma fácil y precisa. Para preparar la suspensión bacteriana, primero disolver 0,5 miligramos de polvo liofilcido S.aureus en 0,3 mililitros de medio de cultivo LB. Mezcle bien la suspensión y rastree las bacterias en placas de agar de soja trípticas para su incubación durante 16 horas a 37 grados centígrados.
A la mañana siguiente, elija una sola unidad de formación de colonias bacterianas para el cultivo en tubos de caldo de soja trípticos durante 24 horas a 37 grados centígrados. Cuando las bacterias están en la fase de crecimiento logarítmico medio, transferir 1 mililitro de bacterias en un tubo de 1,5 mililitros, y recoger las bacterias por centrifugación. Luego, lave el pellet de células bacterianas tres veces en 100 microlitros de PBS por lavado, resuspendiendo las bacterias en 3 mililitros de PBS fresco después del lavado final.
Para configurar el moho de infección ósea, confirme una falta de respuesta a la pizca de la pata en un conejo blanco de tres meses de edad de tres kilogramos de edad, y utilice una afeitadora eléctrica para eliminar el cabello de la región tibial proximal en la dirección del crecimiento del cabello. Desinfectar la piel expuesta con solución de yodo povidona, y utilizar una pluma y una regla para marcar el extremo superior de la tibia y la posición del agujero de perforación para la inyección de S.Aureus, teniendo cuidado de que la posición del agujero de perforación está en el medio horizontal de la meseta tibial. A continuación, utilice un bisturí número 11 para hacer una incisión en la piel, seguido de una incisión de un centímetro en el peritoneo.
Usando una unidad de perforación ósea eléctrica, perforar un agujero de dos milímetros de diámetro en la tibia, y presionar el agujero con un cilindro de dos milímetros de dos milímetros de largo de cera ósea. Retire cualquier cera ósea de repuesto a lo largo del plano horizontal de la meseta tibial, y confirme que el agujero está lleno de cera ósea. Luego, usa suturas quirúrgicas absorbibles para coser el periosteo y la piel en una sutura de colchón vertical para evitar que el animal mastique los puntos.
Y utilice un inyector de asepsia de un mililitro para inyectar lentamente una vez 10 a las ocho unidades formadoras de colonias por mililitro de solución de S.Aureus en el orificio de perforación. En los días siete, 14, 21 y 28 después de la inyección, coloque los conejos infectados en un retén de conejo con la cabeza y el oído fuera del retén, y recoja muestras de sangre de las venas auriculares para los glóbulos blancos y el análisis de proteínas C reactivas. Después de la anestesia, usa un bisturí número 11 para hacer la piel tibial del centímetro y las incisiones peritoneales, y limpia la cera ósea.
A continuación, utilice una unidad de taladro óseo eléctrico para perforar dos orificios adyacentes de 4,8 milímetros de diámetro para desbridar el hueso necrótico, y utilice una cuchara ósea para debridar la médula ósea necrótica y el tejido de granulación. Luego, raspa y limpia el tejido óseo entre los dos agujeros, y esparce un mililitro de la médula ósea desbridada sobre placas de agar de sangre de oveja para una incubación nocturna a 37 grados Celsius. A la mañana siguiente, seleccione platos con 30 a 300 colonias, y calcule el número de unidades formadoras de colonias por animal infectado.
El día 28 después de la infección, agregue un gramo de polvo de clorhidrato de vancomicina a 9,5 gramos de sulfato de calcio de grado médico, y utilice una espátula para agitar la mezcla con tres mililitros de solución salina normal durante 30 a 45 segundos. Agregue el producto mezclado en un molde flexible de gel de sílice y deje que el producto se seque a temperatura ambiente durante 15 minutos. A continuación, flexione el molde para eliminar el sulfato de calcio cargado por vancomicina, o cordón VCS.
Para el tratamiento antibiótico y la implantación del hueso autógeno, primero, vuelva a exponer la tibia lesionada antes de afeitar la región de la cola, y desinfectar la piel de cola expuesta con solución de yodo povidona. Use tijeras quirúrgicas para cortar la cola, y use suturas quirúrgicas absorbibles para cerrar la piel en una sutura de colchón vertical para evitar que el animal mastique los puntos. Usa un bisturí número 11 para cortar la piel de la cola y revelar el hueso de la cola.
Retire cualquier músculo, tejido blando y periosteo, y desprenda el coxis en cada articulación. Transfiera los fragmentos óseos a un plato de plástico de 100 milímetros que contenga solución salina estéril. A continuación, utilice tijeras curvas para implantar cuatro piezas del cordón VCS en la cavidad de la médula tibial, y utilice fórceps curvos para llenar el defecto óseo con ocho piezas de fragmentos de coxis autogéneros.
Luego, cierre las incisiones del periosteo y la piel con suturas quirúrgicas absorbibles de una manera de sutura de colchón. Los niveles de proteína C reactiva y glóbulos blancos son más altos en el grupo modelo de infección ósea que en los animales de control. Dos, cuatro, seis y ocho semanas después del tratamiento óseo autógeno VCS o VCS, los niveles de proteína C reactiva y glóbulos blancos se reducen significativamente.
Las imágenes de reconstrucción bidimensional indican un aumento progresivo del volumen óseo durante el período de 12 semanas después del tratamiento con VCS o VCS y hueso autógeno, mientras que la pérdida ósea es significativa en el grupo modelo de infección ósea no tratada. Para analizar los índices cuantitativos de regeneración ósea, las imágenes del modelo 3D se pueden reconstruir utilizando datos de mapa de bits, y se puede seleccionar un diámetro ovalado de 4,8 milímetros por región ovalada de 9,6 milímetros de longitud de interés en cada hueso. La relación entre el volumen óseo y el volumen tisular en el grupo modelo de infección ósea no tratada es significativamente menor que la medida en los grupos óseos autógenos VCS y VCS.
El número trabecular y las puntuaciones de espesor en el grupo óseo autógeno VCS son significativamente más altas que las del modelo de infección ósea no tratada y los animales VCS. Además, las puntuaciones de separación trabecular en el grupo óseo autógeno VCS son notablemente más bajas que las medidas en el modelo de infección ósea no tratada y los grupos VCS. Tenga cuidado de seleccionar conejos con el peso corporal adecuado.
Bloquear la solución de Staphylococcus aureus con cera ósea. Desbridar el hueso necrótico por completo, y perforar los dos agujeros adyacentes de 4,8 milímetros de diámetro. Después del procedimiento, se pueden realizar otros métodos de medición diagnóstica como ultrasonido, radiología y tomografía computarizada para monitorear los procesos patológicos de la infección ósea y la reparación.
Este modelo mejorado de infección ósea y la combinación de VCS y tratamiento óseo autógeno podrían ser útiles para estudiar el mecanismo de subrayado de la infección ósea y la regeneración ósea. Como el polvo liofilizado Staphylococcus aureus es peligroso, la suspensión bacteriana siempre debe prepararse en un laboratorio bacteriano aislado.
