Quantitative Analyse von Vitamin-A-Metaboliten in okulärem und nicht-okulärem Gewebe von Mäusen mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie

Unser Labor untersucht zwei wichtige Vitamin-A-Transporter, STRA6 und Rbpr2. Diese Membranproteine erleichtern die Aufnahme von Vitamin A aus dem Blut in Gewebe wie Auge und Leber. Durch HPLC können wir die physiologischen Funktionen dieser Transporter untersuchen, indem wir ein systemisches Vitamin-A-Profil in transgenen Mäusen erstellen.

Eine weitere Technik, die in unserem Fachgebiet verwendet wird, ist die Oberflächenplasmonenresonanz, SPR, die die Bindungsaffinitäten und Kinetik eines Proteins nach seinem Geschmack untersucht, und wir haben SPR angewendet, um die Bindung zwischen STRA6 oder Rbpr2, dem RBP4-Retinol-Bindungskomplex, zu untersuchen. Eine aktuelle Herausforderung dieser Methode ist der Probendurchsatz. Der Schritt der Lösungsmittelverdampfung ist ein großer Engpass innerhalb dieses Protokolls, und zukünftige Forscher sollten mit Trocknungsmethoden wie der Stickstoffabblasverdampfung experimentieren, die im Vergleich zur Vakuumverdampfung einen weitaus größeren Durchsatz aufweisen.

Wir haben die Rolle von Rbpr2 als wichtigen Vermittler bei der Aufrechterhaltung der systemischen Vitamin-A-Homöostase durch seine Funktion in der Leber bestimmt. Und die Störung der Rbpr2-Expression in transgenen Mäusen hat zu einer signifikanten Störung des Vitamin-A-Spiegels in allen untersuchten systemischen Geweben geführt, die durch HPLC quantifiziert wurde. Die meisten anderen Protokolle für den HPLC-basierten Vitamin-A-Nachweis verwenden Reverse-Face-Methoden und erlauben in der Regel keine separate Auflösung von Retinoid-Isomeren.

Unser normales Gesichtsprotokoll ermöglicht die Auflösung sowohl von Retinaldehyd- als auch von Netzhautisomeren, was es uns ermöglicht, ein detailliertes Vitamin-A-Profil zu erstellen, was angesichts der Bedeutung der Vitamin-A-Photoisomerisierung in der Phototransduktionskaskade von entscheidender Bedeutung ist.