Der Mechanismus, der DEM CRPS I zugrunde liegt, ist noch unklar. Die Entwicklung eines präklinischen Tiermodells, das CRPS I iimitiert, wird entscheidend für die Erforschung der Mechanismen sein, die CRPS I zugrunde liegen. Das Ratten-CPIP-Modell weist viele CRPS-I-ähnliche Simitance auf, zu denen Hindlimb-Ödeme und Hyperämie im frühen Stadium gehören. Nach der Modelleinrichtung, gefolgt von anhaltenden thermischen und mechanischen Überempfindlichkeiten.
Beginnen Sie mit der Anästhesisierung aller Ratten mit Natriumphenobarbital. Stellen Sie sicher, dass die Ratten richtig beästhebt werden, indem Sie ihre Hinterpfote oder ihren Schwanz mit Zangen kneifen. Und legen Sie Tierarzt Salbe auf die Augen.
Halten Sie die Ratte während des Eingriffs auf einem 37 Grad Celsius erhitzten Pad. Schmieren Sie die rechte Hinterpfote und den Knöchel mit Glycerin. Dann schieben Sie einen Nitrile 70 Durometer O Ring in die größere Seite eines ein Punkt fünf Milliliter Rohr mit der Fangkappe abgeschnitten.
Setzen Sie die Hinterpfote vorsichtig in das Hohlrohr ein, bis sie den Boden erreicht. Nach und nach schieben Sie den O-Ring vom Rohr in die rechte Hinternin in der Nähe des Sprunggelenks. Und lassen Sie es dort für drei Stunden.
Wenden Sie die gleiche Behandlung auf die Scheingruppe von Ratten an, außer mit einem gebrochenen O-Ring, der keine Ischämie auslösen sollte. Nach drei Stunden den O-Ring abschneiden und die Ratte überwachen, bis sie genug Bewusstsein zurückgewinnt, um die Brustbescheinheit aufrechtzuerhalten. Stellen Sie die Ratte nicht in die Gesellschaft anderer Ratten, bis sie vollständig aus der Anästhesie geborgen ist.
Legen Sie die Ratte in eine transparente Plexiglaskammer auf einem Mesh-Boden und gewöhnen Sie die Ratte 30 Minuten lang an die Umwelt, bevor Sie verhaltensauffällig werden. Verwenden Sie von frey Filamente, um die Ratte auf mechanische Allodynie zu testen. Beginnen Sie den Test vom mittleren Filament aus, indem Sie ihn vertikal auf die mittlere Plantaroberfläche der Hinterpfote auftragen.
Tragen Sie die geeignete Kraft auf, um das Filament für bis zu fünf Sekunden zu biegen. Ein plötzliches Zurückziehen der Pfote gilt als nocifensives Verhalten. Führen Sie den mechanischen Allodynie-Test an den Tagen drei, zwei, eins und jeden zweiten Tag bis zum 13. Tag durch.
Wenden Sie die Up-Down-Testmethode an, um den Schwellenwert zu testen, und eine Dickson-Methode zur Berechnung der 50-Prozent-Pffotenentzugsschwelle. Um auf thermische Hyperalgesie zu testen, verwenden Sie hargreaves-Methode, indem Sie direkt auf den Lichtstrahl zielen, der von einer 50-Watt-Lampe auf die Hinterpfote emittiert wird. Messen Sie die Pfotenentzugslatenz, indem Sie 20 Sekunden als Cutoff-Schwelle festlegen, um übermäßige Verletzungen zu vermeiden.
Wiederholen Sie jeden Test dreimal in fünf Minuten Intervallen für jede Hinterpfote, und nehmen Sie den Durchschnitt als Pfote Entzugslatenz. Führen Sie den thermischen Hyperalgesie-Test an den Tagen drei, zwei, eins und jeden zweiten Tag bis zum 13. Tag durch. Um auf Capsaicin induziertes akutes nocifensives Verhalten zu testen, bereiten Sie die 200 Millimolar Capsaicin-Stammlösung mit DMSO vor und verdünnen Sie sie weiter ein bis 1 000 in PBS zur Injektion.
Capsaicin ist ein Reagenz, das Gelenkreizungen bei Haut, Augen und Atmung verursachen kann. Es ist wichtig, eine Maske und eine Brille bei der Zubereitung von Capsaicin-Lösung zu tragen. Dann injizieren Sie 50 Mikroliter des Capsaicin oder eines Fahrzeugs in die Hinterpfote mit einer 30-Spur-Nadel, die an einer Ein-Milliliter-Spritze befestigt ist.
Zeichnen Sie ein nocifensives Verhalten auf, z. B. lecken, beißen oder zucken der injizierten Pfote mit einer Videokamera für 10 Minuten nach der Injektion. Bewerten Sie das Hinterpfotenödem, indem Sie die Erhöhung des Pfotendurchmessers auf 15 Minuten, 24 Stunden, 48 Stunden und 72 Stunden nach dem Modellaufbau messen. Nach der Platzierung des O-Rings am Knöchel zeigte die ipsilaterale Hinterpfotenhaut Zyanose, ein Hinweis auf Gewebehypoxie.
Nach dem Schneiden des O-Rings begann sich die Pfote mit Blut zu füllen und zeigte eine starke Schwellung, was auf eine intensive Hyperämie hindeutet. Die Schwellung nahm allmählich ab und normalisierte sich 48 Stunden nach dem Eingriff wieder. Einen Tag nach der Modelleinrichtung zeigte die ipsilaterale Hinterpfote der CPIP-Gruppe offensichtliche mechanische Allodynien, die 13 Tage des Beobachtungszeitrahmens anhielten.
Die kontralaterale Hinterpfote der CPIP-Gruppe zeigte ebenfalls 13 Tage lang mechanische Hyperalgesie. Bei der Messung der thermischen Hyperalgesie zeigten bilaterale Hinterpfoten von CPIP-Ratten eine signifikant reduzierte Entzugslatenz als Reaktion auf schädliche thermische Reize im Vergleich zu den Scheingruppenratten. Die thermische Hyperalgesie der ipsilateralen Hinterpfote hielt bis zum Ende des Beobachtungszeitrahmens an, während die thermische Hyperalgesie der kontralateralen Hinterpfote sieben Tage andauerte.
Die Schein- und CPIP-Gruppen wurden mit der Capsaicin-Injektion auf nocifensives Verhalten getestet. Bei der Injektion eines Fahrzeugs zeigte die Scheingruppe eine leichte nocifensive Reaktion und die CPIP-Gruppe zeigte eine signifikant höhere Reaktion. Noch wichtiger ist, dass CPIP-Ratten signifikant höhere Reaktionen auf die Capsaicin-Injektion zeigten als die Scheingruppe, was darauf hindeutet, dass die CPIP-Ratten ein Ähnliches wie menschliche Patienten mit CRPS-I.By diesem Verfahren aufweisen, die Ratten werden vor und während der Modelleinrichtung besäutet.
Das CPIP-Rattenmodell, das in diesem von Ischmia und Human CRPS I erstellten Protokoll beschrieben wird, mag Simitance. Familien dieser Modelle, mehr Mechanismus über CRPS I kann untersucht werden.
