早期斑马鱼幼虫的小分子筛选和毒性试验

首先，在受精后三天将早期斑马鱼胚胎收集在培养皿中。将 1000 微升微量移液器设置为 100 微升体积，将一个看起来健康的孵化胚胎转移到 96 孔板的每个孔中。现在，将必要量的测试化学品移液到 12 孔板的每个孔中。

然后，使用 E3 培养基将总体积调节至 2.4 mL。根据用于溶解原液测试化学品的溶剂准备载体对照。使用 200 微升移液器，从 96 孔板的每个孔中去除任何现有的 E3 溶液。

对于每个浓度，使用八通道微量移液器将其替换为 100 微升制备的测试培养基。确保每个浓度总共测试 24 只幼虫。24 小时后，使用体视光学显微镜进行形态学评分。

使用二进制方法对形态进行评分，其中 absent 表示形态正常，存在表示形态异常。评分完成后，从每个孔中取出 50 μL 培养基。用 50 微升新鲜制备的测试培养基替换它。

取出并记录任何死亡的幼虫，然后在 28.5 摄氏度下以 14 小时的光照和 10 小时的黑暗循环孵育幼虫。斑马鱼在受精后 5 天在药物暴露 2 天后表现出不同的表型。观察到未受影响的斑马鱼正常，而一些鱼则明显出现轻度心包水肿。

在其他人中观察到严重的心包水肿，伴有卵黄出血和卵黄扩展。还观察到发育延迟，色素沉着、鱼鳔和总长度减少。其他表型包括斑马鱼蛋黄肿胀和尾鳍扭结、尾鳍缺失和脊索弯曲。

严重病例表现为截断和死亡伴坏死。