Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

我们致力于建立一个可靠的干眼症模型。我们通过去除眼睛中的 ELG 和 ILG 成功地复制了水性缺乏性干眼症的病理状态。由于 ILG 的解剖位置较深，ELG 和 ILG 的联合切除更具挑战性和侵入性。

而且在手术过程中还会引起出血，这对我们的作能力提出了很高的要求。我们的模型已成功诱导了显着的房水缺陷型干眼症，对动物的损伤最小，并显着简化了外科手术。构建的小鼠模型与严重干眼症（如 Sjogren 综合征和 Stevens-Johnson 综合征）高度相似，为相关研究提供了有力支持。

该方法避免了系统注射效应，解决了局部注射效应持久性差的问题，克服了干眼模型的缺点，并通过消除对专用动物环境的需求简化了实验过程。首先，将麻醉的鼠标置于侧卧位，并在手术显微镜下暴露手术区域。使用齿形镊子夹住鼠标面部右侧的皮肤。

在线的中点切开一个，使外甲骨和下颌线与内眼角相交。然后暴露肌肉组织并小心地去除位于肌肉上的 ELG。现在将皮肤切口延伸到内眼角。

钝地分离肌肉，找到肌肉下方的浅红色腺体。然后剥离并取出 ILG。使用带有持针器、眼科手术剪刀和镊子的 5-0 缝合线缝合切口。

手术结束时涂抹氧氟沙星软膏以防止感染。去除单侧 ELG 和 ILG 后，将小鼠置于有节奏的 12 小时明暗循环的环境中，并且可以自由获取食物和水。取包装良好的酚红线进行撕裂测量。

麻醉缺水干眼症小鼠后，轻轻拉下待测眼睛的下眼睑。将酚红线的顶部放入下眼睑的内侧和外侧三分之一处，并立即启动计时器。在规定的时间后，小心地缩回下眼睑并小心向下去除酚红线。

利用酚红线外袋上提供的刻度从线的顶部到整个红色部分进行测量。使用电子秒表准确记录测试持续时间。要制备用于染色的组织切片，请取从安乐死小鼠中提取的眼球。

然后将眼球包埋在最佳切割温度化合物中，并利用冷冻切片机获得 5 至 7 微米厚的冷冻组织切片。对于角膜 mRNA 提取，在显微镜下使用剪刀和镊子从后杆切下眼球。分离晶状体并清理多余的巩膜和虹膜，但留下 0.5 毫米的白色巩膜和整个角膜。

泪腺切除术后两周后，与正常组相比，干眼小鼠的泪液分泌明显减少。在干眼组的角膜上皮和基质层观察到鳞状化生和炎症细胞积累。与正常组相比，干眼组角膜上皮细胞中角蛋白 12 的表达显著降低。

与正常组相比，干眼组角膜上皮细胞中 Pax6 表达显著降低。干眼组异常分化角膜上皮细胞的标志物 Sprr1b 的表达显著高于正常组。