大规模、自动化生产脂肪来源的干细胞球体，用于 3D 生物打印

该协议的重要性取决于减少人为错误和微生物污染。此外，负责生产数千个用于3D生物打印方法的球体。然而，这个问题的主要优点是它优化了工作时间。

软件参数至关重要，因为它们会影响旋转椭球体的最终质量。最好的建议是仅使用细胞培养基进行测试。该方法的视觉演示至关重要，因为它是一种古老的传统3D细胞培养方法，该方法基于Start，即用10毫升血清移液管收获干细胞悬浮液并将其转移到50毫升离心管中。

然后，在400 RCF下离心5分钟，得到ASC沉淀。使用含有10%FBS的DMEM-Low重悬细胞沉淀。进行细胞计数后，将ASC放在单独的15毫升离心管中，以接种用非贴壁水凝胶微成型的81和256衰退。

有关所用单元格数量的详细信息，请参阅文本手稿。在含有81或256个圆形凹槽的硅胶模具的中心加入500微升无菌的2%超纯琼脂糖溶液。40分钟后，从硅胶模具中取出超纯琼脂糖，并将其置于12孔塑料板的孔中。

在孔中加入两毫升DMEM-Low与微成型琼脂糖，并在37摄氏度下用5%的大气二氧化碳供应孵育至少12小时，然后再接种ASC。确保层流打开，并且机柜的气流正常工作。确认设备已连接到正确的电压，并且平板电脑已连接到设备。

检查机柜保护玻璃的高度是否与设备的传感器标记处于同一水平。按设备左侧的开或关按钮。然后，等待平板电脑和设备启动。

将吸头盒、离心管架和含有微成型琼脂糖水凝胶的板放置在设备的工作空间中。在平板电脑中打开的软件中，单击实验室软件编辑器。设置虚拟工作台并选择移液器、吸头盒、塑料管架和板的位置。

单击切换到"过程"按钮，以包括设备在整个实验过程中执行的所有参数和命令。等待工具栏和过程列表在软件中打开。最初，为了指示命令，请合并要移液的样品数量并将其拖动到过程列表中。

然后，单击软件上的试剂转移"命令按钮，将ASC悬浮液转移到含有微霉菌的12孔板的孔中，并将其拖动到程序列表中。单击属性"以设置设备的开始"和结束"位置以转移样品。等待软件返回到"工作表"页面。

按照文本手稿中所述设置 ASC 自动播种的参数。选择水作为标准液体类型。单击选项"按钮以设置参数，以创建ASC的同质悬浮，如文本手稿中所述。

单击软件顶部栏上带有复选标记符号的按钮，以确保没有编程错误。单击软件顶部栏上的播放"按钮以启动程序。让设备按程序启动。

并等待它发出声音，表明它已完成。收集12孔板，然后将其在37摄氏度下与5%的大气二氧化碳供应孵育至少18小时，以允许完整而紧凑的球体形成。在培养一天、三天和七天后手动收获球体以进行分析。

用微量移液管冲洗培养基，以从微模塑的非粘附琼脂糖水凝胶中释放球状体。使用微型移液管手动收集球状体，并将其转移到15毫升离心管中。从微成型非粘性水凝胶中共测量了85个和160个球体，分别有81个和256个圆形衰退。

自动移液系统在15分钟内将ASC细胞悬浮液接种到单个12孔板的12孔中。使用81微成型的非粘附水凝胶，在这项研究中产生了972个球状体。同时将256微塑的非粘附水凝胶，产生3072个球体。

分析ASC球体的尺寸和形状的均匀性。来自微霉菌的ASC类固醇在培养期间具有81个衰退，显示出均匀的直径。与来自具有256次衰退的微霉菌的ASC类固醇相比，最小和最大的直径比接近于来自微霉菌的ASC球体的1，具有81和256次衰退。

可行性，形态学和力分析为ASC球体的成功大规模生产提供了证据。大多数情况是确保问题突然解决而没有错误。