基于渗透泵的药物递送用于中枢神经系统 体内 髓鞘再生研究

渗透泵对髓鞘再生的研究具有重要价值，特别是对半衰期短、血脑屏障通透性差、外周副作用大的药物。渗透泵可以绕过血脑屏障，将药物直接输送到胼胝体，有效提高药物的生物利用度，特别是对于一些半衰期短的药物。首先，用牙条和耳杆将麻醉鼠标的头部固定在立体定位装置中。

覆盖动物身体，手术部位除外。使用手术刀，从颈部底部到眼睛之间对皮肤进行一厘米长的中高潮切口，以暴露颅骨。使用含有30%过氧化氢的棉签，轻轻擦拭颅骨表面以可视化颅骨结构。

调整齿条和耳杆的高度，将 lambda 点和前牙点放置在相同的高度。将 10 微升和 33 号注射器针头的尖端轻轻放在前凸点，并将 X、Y 和 Z 坐标重置为零。将注射器移动到注射部位。

在注射部位的颅骨上慢慢钻一个小毛刺孔，而不用一微升26号和0.45毫米注射器针头穿透硬脑膜。通过孔将微升注射器针头缓慢插入脑组织，直到达到一定深度。以每分钟0.5微升的速度注射1.5微升的1%赖索铁蛋白。

等待五分钟，然后拔出注射器，并用5-0个手术缝合线缝合皮肤。将单独接受手术的小鼠放在笼子里，并在手术后每天监测小鼠。用组织粘合剂将三个深度调节垫片连接到脑输液套管的针上，以达到接近胼胝体的1.5毫米注射深度。

通过将带有泵包的注射器针头连接到一毫升注射器上来填充渗透泵，然后吸出药物。将泵保持直立位置。将注射器插入泵顶部的开口中，并缓慢注射药物而不会产生气泡。

当液体从开口流出时，慢慢拉出注射器。使用剪刀或钳子，从流量调节器上取下白色法兰。将流量调节器插入泵中。

要确定渗透泵中是否存在气泡，请在填充前后分别称量渗透泵。根据动物的大小将导管修剪到所需的长度。将导管连接到脑输液套管上。

使用注射器用药物填充导管，而不引入空气。将导管连接到流量慢化器，使其覆盖暴露的流量慢化器约四毫米。将填充的泵浸入无菌的0.9%生理盐水或PBS中，在37摄氏度下至少四到六个小时。

更喜欢在实施后延长一夜。再次将鼠标固定在立体定位器上。打开先前缝合的手术切口，将切口扩大到肩胛骨。

将肩胛骨处的皮肤与皮下结缔组织分开，使用止血钳或镊子打开腔，并将渗透泵放入腔中。用棉签轻轻擦拭并露出建立脱髓鞘模型时产生的颅骨表面上的针孔。将脑输液套管垂直穿过针孔，并用组织粘合剂将其固定在颅骨上。

用一把剪刀取下脑输液套管上方的可拆卸标签。缝合切口或用组织粘合剂将其固定。手术后将动物单独放在笼子里。

在实施DAPI染色后发现，脑组织中的针孔位于白质的正上方，表明渗透泵的脑输液套管的成功实施。使用成熟的少突胶质细胞标记物MAG探针进行原位杂交实验，以标记新分化的少突胶质细胞。结果表明，UM206处理在脱髓鞘区域产生的MAG阳性细胞多于对照组。

脱髓鞘区域透射电子显微镜检查显示，与对照组相比，UM206治疗组的髓鞘轴突数量增加，提示UM206诱导更高水平的髓鞘化。在准备渗透泵时，请注意不要将任何气泡引入系统。