从多萨尔海马的急性切片准备全细胞记录和神经元重建在成人小鼠的登特陀螺

这个程序的总体目标是准备从海马体的单体中间区域的健康急性切片，以长期记录和重建成年小鼠的神经元。许多像我们这样的实验室，研究海马在特殊学习和导航中的作用。用于此目的的常见技术包括行为实验、解剖追踪和区域特定操作。

我们已经开发出一种脑切片方法，将电生理学与这种技术相结合，使活体在录像中直接相关。此协议的优点是，它结合了一个简单的程序，以获得横向切片与使用保护解决方案，以提高脑组织的生存能力。这种方法特别适合在行为实验中使用成熟动物。

要开始此程序，在水槽旁边准备本部分所需的设备。在冰上准备一个150毫升的烧杯和两个直径为10厘米的玻璃培养皿。画三部分线，直到塑料培养皿的底部，并放置这个菜靠近冰盘。

您还需要胶水和振动的标本持有人。然后为手术台配备大剪刀、小剪刀、圆形尖钳、细尖钳、薄金属铲、大金属铲和转移移液器。用切削溶液剥去培养皿。

一道菜做头部解剖，另一道菜做大脑解剖。在后者中，也放置一张滤纸。还向烧杯填充 30 毫升切割液。

这将需要输液。用冰冷切割溶液填充振动托盘，并使用碳水化合物冒泡装置保持所有溶液含氧。将冷冻批次切割溶液制成的碎冰加入冷新鲜切入溶液中，以降低温度。

注意，在切片时要远离刀片上的冰。在解决方案中执行了几乎所有在人均化之后的步骤。这有助于将新陈代谢缺氧控制在最低限度。

在恒定的氧气下准备一个装满切割溶液的孵化室。将室内置于35摄氏度的预热水浴中。准备一个带几个独立油井的切片储藏室，并填充存储解决方案。

在室温下保持恒定的氧分。万一组织表达荧光蛋白或光激活蛋白。建议将房间保持在黑暗中。

例如，在盒子内。进行心肌输液后，将鼠标头放入带冰冷切液的培养皿中。用细剪刀打开皮肤，露出头骨。

从前额巨无霸开始，沿着下垂缝合切，直到达到鼻前缝合。小心稍微拉起剪刀，以免脑损伤。在头骨底部做两个横向切口。

使用圆尖钳子拉起平底骨骼。小心也去除脑膜。如果离开，它们可能会在提取过程中损害大脑。

用小铲子轻轻地从头骨底部松开大脑。用一把小铲子，将大脑与颅神经分离，并将大脑转移到第二道培养皿中的一小块滤纸上。使用预冷刀片将大脑沿纵向裂缝切成两半。

使用最小的铲子将两个半球分开。使用最大的铲子将一个半球转移到塑料培养皿，其内陆表面朝下。将皮层皮层与其中一条平行线对齐，以引用第二个切口。

使用一张滤纸干燥多余的溶液。将刀片与线条平行放置，并切开半球的腹腔部分。这个平坦的表面稍后会粘在标本架上。

将半球返回到玻璃培养皿的含氧棉溶液中，并在第二个半球执行相同的程序。将一滴青紫酸胶涂在振动标本架上，用铲子将其铺开，形成薄层。使用铲子的圆侧将半球转移到振动支架上，心室侧向下。

从皮层开始切片将减少收集海马体的底片区域所需的时间。加入几滴冷切溶液来凝固胶水。将标本持有人移入振动托盘，并设置适当的设置，切开大脑，直到看到主海马区。

然后，使用塑料转移移液器收集切片。将每片切片转移到孵化室，让它休息12分钟。同时，继续切割下一个切片。

孵化12分钟后，将切片转移到储藏室。让它休息，直到实验开始。为了证明我们准备的纯度，我们将其与冠状动脉制剂进行比较，后者通常用于记录从多骨海马。

这里显示的是，从两个月大的小鼠急性切片中凹痕陀螺的上叶叶获得的微幅干扰对比微图。在横向切片中，神经元大多显示光滑的表面，只有黑色箭头表示的可能对比边界。然而，冠状切片中的神经元经常出现过程，并显示出由白色箭头表示的对比鲜明的轮廓。

这表明横向切片中神经元的可行性更好。根据这种印象，在我们的横向切片中修补过程中密封形成的平均时间明显快于日冕切片。作为细胞完整性的一般代理，我们记录颗粒细胞和帕瓦尔布明阳性神经元的休息膜潜力，其中日冕和横向切片的两种细胞类型的去极化显著增加。

这最终导致更多的细胞，不得不排除在日冕准备。当颗粒细胞轴突在横向平面中运行时，记录的细胞的重建导致在我们的准备中检索到完整的轴突。在冠状动脉切片中，轴突可能很容易被切断的情况并非如此。

此外，横向切片中帕瓦尔布明正神经元之间的形态重建允许描绘广泛的轴突和树突树突，包括一个小细节的可视化，如树突脊柱。总之，我们提出了一种切片方法，以获得具有高神经元生存能力的成年小鼠的横向海马切片。该方法可用于测量电生理体外调查与解剖和行为研究侧重于海马体的中间端部分。