Tigriopus桡足的个体培养及其交配行为的定量分析

这种栽培技术的主要优点是，你可以获得处女的科普，同时控制他们的配对经验，并跟踪他们的发展。以下行为分析方法有助于对岩石潮汐池中常见的浮游动物的Tigriopus动物的配合保护行为进行控制和可重复的实验。虽然这些方法可以提供对Tigriopus的生殖行为的洞察，它们也可以用来研究遗传和环境因素如何影响这些动物的生理和行为。

首先，使用巴斯德移液器收集携带透明橙色鸡蛋的麦格雌性从股票培养。通过温和的移液用干净的培养介质冲洗女性。接下来，将每个女性放入具有清洁培养的六井细胞培养板的单个井中。

然后把盘子放在孵化器里培养雌性，直到它们释放卵囊。卵囊释放后，使用巴斯德移液器将雌性从盘子的井中去除。一旦动物在第一个动物阶段或CI开始出现，使用P-10微管收集它们。

每两到三天，监测井中有被剥去的口水。在此之后，通过检查它们的天线形态对动物进行性攻击。要正确识别成年女性，请确保她们已经在培养井中脱了五口，因为成年女性和青少年之间的天线形状差异在某些人群中并不明显显著。

选择适当阶段和性别的动物后，用细磨鱼食喂养选定的个体。当动物吃的时候，准备两个48孔的平底细胞培养板作为测试室。30分钟后，通过移液冲洗每个动物，将四口井连续打入一个装满清洁人工海水的24孔板。

然后将冲洗过的个体放在 LED 灯垫上的板 A 和 B 的孔中。让动物适应30分钟，然后使用巴斯德移液器将目标从B板转移到A板。首先，检查视频中每个目标被转移到板 A 上的井的时间。Next，定义男性的守卫尝试的开始，作为男性天线与目标任何身体部位的接触。

将雄性天线与目标身体分离时，男性的护身尝试的终止定义为点。然后，定义由男性的后体弯曲开始交配，然后重复按一个对女性的尿样。首先，使用电影编辑软件修剪影片，生成以感兴趣的情节为特色的视频剪辑。

然后，打开 ImageJ 并导入视频剪辑。选择隐蔽的 8 位灰度选项以减少图像处理所需的内存。接下来，选择用于空间校准的直线选择工具，然后沿井的直径绘制一条选择线。

打开设置比例菜单，并在已知距离框中输入已知长度，并在长度单位框中输入单位。在此之后，打开属性菜单并在帧间隔框中输入帧间隔。通过选择插件和 MtrackJ 打开 MtrackJ 插件。

然后，单击对话框窗口中的跟踪按钮以打开跟踪配置菜单。检查在跟踪过程中应用局部光标捕捉，并选择深色质心作为捕捉功能。接下来，单击 MTrackJ 对话框窗口中的添加按钮开始跟踪。

放置光标以覆盖要跟踪的视频剪辑中的个人。然后，单击以检测方块内对象的暗质质。若要生成数据表，请单击 MTrackJ 对话框窗口中的度量表，然后单击影片按钮以生成以彩色线条绘制的跟踪轨迹的影片。

最后，单击 MTrackJ 对话框窗口中的保存按钮以保存结果，包括跟踪的二维轨迹中的数据。在这个实验中，记录和观察了Tigriopus的配偶保护行为。分析表明，在男女对和男、女对中，男女对和男、女对的平均守卫尝试时间不同，男、女对的男对男女对的穿防尝试时间比男、女对的男女对的男女对平均穿防尝试时间短。

对新形成的Tigriopus卡利夫诺尼斯的两维空间跟踪显示，在守卫尝试前三秒，雄对和雄对往往比雄女对显示更高的速度。这项技术开发后，为伦理学、生物化学和进化遗传学领域的研究人员探索这类动物的独特交配系统铺平了道路。