这种预处理的总体目标是生成小鼠,并且TRPV1通道在超薄区域脱敏。这种方法可以帮助回答神经制药领域的关键问题。该技术的主要优点是,超低选择性TRPV1脱敏可以通过一种非常简单的方法引起。
要开始这个程序,麻醉小鼠与五巴比妥钠内皮,并检查右反射的损失。对于皮下治疗,将RTX以每毫升20微克的速度注射到颈部背部,体积为每10克体重0.1毫升。对于控制组,以相同方式注入车辆。
通过金属管通过一次性 27 表针,露出针头的 3 到 3.5 毫米尖端。然后用手指牢牢地握住老鼠的鳞骨。在头皮上横向移动针头,当针尖钩钩在缝合线上时,找到缝合线。
将尖端向右转约一毫米,然后以玫瑰色方式移动尖端以找到日冕缝合线。之后,缓慢而垂直地插入针头。将RTX溶液注入超过10秒,然后再按住10秒。
随后,慢慢取针,将鼠标返回其家中的笼子。RTX 注射一周后,在测试前至少 60 分钟,将鼠标转移到测试室。在测试前至少 30 分钟,将鼠标放在有机玻璃笼中,以便其适应环境。
然后在测试前20分钟,以每公斤300毫克的价格给小鼠服用对乙酰氨基酚。将鼠标松散地握在一个小布袋中,并将一根 30 量针插入右后爪的脚跟。将针头皮下推进到步行垫附近,以每毫升0.05微克的速度注射20微升RTX溶液。
随后,测量每个五分钟方块中受影响爪子的咬爪区域的舔咬行为周期。RTX 注射一周后,将鼠标转移到测试室。将鼠标放在有机玻璃笼中。
将斑点标记为距离尾部底部 1.5 厘米和 2.5 厘米。接下来,将鼠标松散地握在一个小布袋中,用钝探针对斑点施加压力。请注意,为避免组织损伤,请施加250克的截止压力。
确定引出逃逸行为所需的压力,并计算在两个点确定的压力的均值阈值。每 15 分钟重复一次这些过程。获得基线后,以每公斤300微克的价格对小鼠进行乙酰氨基酚的内向,然后每15分钟重复一次尾压测试,直到达到90分钟。
这两个数字显示了SC或ICV治疗小鼠对RTX的植物内注射的反应能力。前10分钟,经过车辆处理的老鼠的舔咬行为非常显著。虽然SC预处理小鼠没有显示舔和咬行为,ICV预处理小鼠通常对RTX的植物注射作出反应。
此外,对乙酰氨基酚的内向性给用减少了车辆ICV治疗小鼠的舔和咬行为,但在RTX ICV治疗小鼠中则不减。此图显示了对乙酰氨基酚在尾压测试中每公斤300微克的镇痛作用。对乙酰氨基酚在两次测试中降低了车辆预处理小鼠的异常反应,但对乙酰氨基酚的镇痛作用在使用RTX预处理的ICV小鼠中受到抑制。
一旦掌握,这种ICV注射技术可以应用于其他药物。不要忘记,使用 Resiniferatoxin 可能会非常危险,并确保在操作时使用橡胶手套和眼镜进行保护。