تقييم السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة والوسيطة الخلوية في الخلايا السرطانية باستخدام الاختبار الحيوي لمراسل السمية الخلوية المعتمد على الأجسام المضادة

من المعروف أن السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة والوسيطة الخلوية هي آلية مهمة تمارس من خلالها الأجسام المضادة تأثيرات معينة بوساطة مناعية. لذلك نريد إيجاد طريقة أفضل لاختبار فعالية دواء الأجسام المضادة في علاج السرطان ، باستخدام ADCCSA. البروتوكول سريع ومباشر.

باستخدام بروتوكول المزج والقراءة البسيط ، يمكننا الحصول على النتيجة في غضون يوم واحد ، وبالتالي تسريع البحث. باستخدام المقايسة الحيوية من ADCC ، يمكننا إجراء فحص جماعي لدواء الأجسام المضادة العلاجية بشكل أكثر دقة. نسبة الإشارة إلى الضوضاء في الفحص عالية ، مما قد يساعد في التقييم الدقيق للجسم المضاد العلاجي.

للبدء ، الثقافة ، الخلايا التائية المستهدفة BHT 101 و SW 1736 الخلايا حتى تصل إلى 80٪ التقاء في قوارير T75. بعد إزالة الوسائط ، اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام PBS واحتضنها بمليلتر واحد من المخزن المؤقت لتفكك الخلايا غير الأنزيمي لمدة خمس دقائق. أضف PBS لإيقاف التفاعل.

قم بتدوير الخلايا عند 135 جيجا لمدة خمس دقائق ، ثم أضف خمسة ملليلتر من PBS. حدد عدد الخلايا وبذر الخلايا عند 15،000 خلية لكل بئر في 96 بئر ، صفيحات دقيقة من البوليسترين الأبيض ذات قاع شفاف ومسطح. للبدء ، قم بإعداد الخلايا التائية المستهدفة BHT 101 و SW 1736 الخلايا للمقايس.

ثم قم بإعداد سيتوكسيماب للارتباط بمستقبلات عامل نمو البشرة ، و Bevacizumab كعنصر تحكم سلبي. لعمل المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية ADCC ، أضف 1.4 مل من مصل الغلوبولين المناعي المنخفض G إلى 33.6 مل من RPMI 1640 ، كما هو موفرة في المجموعة. باستخدام المخزن المؤقت ، قم بتخفيف الأجسام المضادة لتحضير 400 ميكرولتر من كل جسم مضاد بثلاثة تركيزات مختلفة.

سخن المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية ADCC في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. قم بإزالة خلايا مستجيب المقايسة الحيوية ADCC من التخزين البارد تحت الصفر 80 درجة مئوية ، وضعها في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق تقريبا. قم بتأرجح القارورة برفق وافحصها بصريا دون قلبها أثناء عملية الذوبان.

ثم انقل 630 ميكرولتر من الخلايا المستجيبة إلى أنبوب سعة 15 مليلتر يحتوي على 3.6 مل من المخزن المؤقت ADCCSA. اقلب الأنبوب برفق مرتين لخلط الخلايا مع المخزن المؤقت. للبدء ، قم بإعداد الخلايا المستهدفة والخلايا المستجيبة والأجسام المضادة المطلوبة لمقايسة ADCC.

بعد الحضانة الليلية ، قم بإزالة الوسائط من الخلايا المستهدفة وأضف 25 ميكرولترا من المخزن المؤقت للأحماض الحيوية ADCC متبوعا ب 25 ميكرولترا من المضادات إلى الآبار المناسبة. ثم أضف 75،000 خلية منشقة في 25 ميكرولترا من المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية ADCC لكل بئر في الصفيحة الدقيقة 96 التي تحتوي على خلايا مستهدفة ، واحتضان اللوحة لمدة ست ساعات عند 37 درجة مئوية. لتحضير كاشف فحص لوسيفيراز ، أضف المخزن المؤقت لفحص لوسيفيراز إلى ركيزة فحص لوسيفيراز المجففة.

ثم أضف 75 ميكرولترا من كاشف فحص اللوسيفيراز إلى كل بئر من اللوحة التي تحتوي على الخلايا المستهدفة والأجسام المضادة والخلايا المستجيبة واحتضان اللوحة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. باستخدام مقياس الإضاءة ، قم بقياس إشارة التلألؤ في كل بئر لتوفير قراءة كمية لنشاط ADCC. لتحليل البيانات ، احسب تحريض الطية باستخدام الصيغة.

تسبب سيتوكسيماب في نشاط ADCC أعلى في جميع التركيزات المختبرة ، ولكن لم يتم الكشف عن أي نشاط ADCC مع Bevacizumab في أي من خطوط الخلايا BHT 101 و SW 11736 ، مما يدل على تأثير ADCC لاستهداف مستضدات الغشاء خارج الخلية EGFR لكلا خطي الخلايا.