يمكن لهذه الطريقة عزل مساهمات طبقات الأنسجة في سلوك الأنسجة العام ، مما يوفر نظرة ثاقبة جديدة على البنية المجهرية للأنسجة. يسمح لنا إطار التشريح المجهري والاختبار الخاص بنا بمقارنة الخصائص الميكانيكية والهيكلية الدقيقة لريقات صمام القلب مباشرة بطبقاتها المركبة. قد يكون من الصعب إتقان التشريح المجهري ، وبالتالي ، يوصى بشدة بممارسة أكبر قدر ممكن قبل بدء دراستك.
أولا ، اجمع المواد المطلوبة ، لوح الشمع ، ماء DI ، الماصة ، المشرط ، المقص الصغير ، الملقط الرقيق ، الملقط المنحني ، الملقط السميك ، والدبابيس. قم بفك الأنسجة من جهاز الاختبار ثنائي المحور وقياس سمكها باستخدام مستشعر الإزاحة بالليزر. ضع المنديل على لوح الشمع.
افحص الجانب البطيني من الأنسجة بحثا عن إدخالات غرد كبيرة. التقط صورة فوتوغرافية للرجوع إليها. انشر الأنسجة بشكل مسطح على لوح الشمع مع توجيه الأذينيين لأعلى.
لتثبيت الأنسجة على اللوحة، ضع دبوسا واحدا بزاوية بعيدا عن الأنسجة في كل زاوية بحيث يسحب الأنسجة مشدودة قليلا. تأكد من أن المسامير خارج الثقوب التي تم إنشاؤها بواسطة السنون عند تركيب الأنسجة وأن الأنسجة مربعة ولا تتحول أثناء التشريح المجهري للطبقة. إذا لزم الأمر ، ضع دبابيس على طول جانب الأنسجة أثناء التشريح لتمديد الأنسجة أكثر.
قم بإزالة العلامات الائتمانية للخرزة الزجاجية. ضع ماء DI على سطح الأنسجة باستخدام ماصة بحيث تغطي الأنسجة بالكامل بطريقة تشبه الفقاعة. لإنشاء الزاوية الأولية، حدد زاوية من العينة المثبتة، وتجنب إدخال الحبال الكبيرة في المناطق الهشة.
ثم ، قم بقطع طبقة A / S عن طريق سحب المشرط برفق فوق سطح الأنسجة على طول ثقوب التركيب للاختبار الميكانيكي. تبدأ حواف القطع في التفكك ، مما يكشف عن طبقة F / V تحتها. باستخدام ملقط حاد ورقيق ، افركي بقوة على طول القطع لزيادة فصل حوافها.
إذا لم يبدأ القطع في طبقة A / S في التفكك ، فقم بتتبع نفس القطع برفق مرة أخرى باستخدام مشرط. اجعل القطع الثاني عموديا على القطع الأول. إذا لم يكن القطعان متصلين ، فقم بتشغيل الملقط الرقيق تحت المساحة الصغيرة من الأنسجة التي تفصل بين القطعتين.
ثم ، استخدم المقص بعناية لقطع الأنسجة. افركي على طول قطع الزاوية بملقط رفيع حتى ينفصل النسيج عن طبقة F/V. بمجرد فصل قطعة صغيرة من الأنسجة ، أمسكها بالملقط الكبير واسحبها برفق لفصل الطبقات المركبة أكثر.
استمر في تقشير الأنسجة أثناء الإمساك بها باستخدام ملاقط أكبر لمنع التمزيق والتمزق غير المرغوب فيه للطبقة المركبة A / S ، وفرك التماس حتى يصل إلى نهاية القطعتين اللتان تم إجراؤهما للزاوية. إذا كانت الزاوية الأولى تعاني من مشكلات كبيرة في الفصل ، فجرب زاوية مختلفة كنقطة بداية. بعد ذلك ، لإنشاء زاوية ثانية ، قم بتمديد القطعتين اللتان تم إجراؤهما للزاوية الأولى عن طريق وضع طرف المشرط في الجزء السفلي من كل قطع وسحبه برفق على طول سطح الأنسجة بحيث تتصل ملحقات القطع بالجروح الأصلية وتستمر في اتباع ثقوب السنين أو الخياطة.
استمر في تمديد التخفيضات وتقشير طبقة A / S المركبة العلوية للخلف أثناء فرك التماس حتى يتم الانتهاء من جانب واحد. لاحظ أنه سيتم فصل الأنسجة بالكامل على طول قطع واحد. بعد ذلك ، قم بإنشاء زاوية ثانية عمودية على نهاية الجانب المقشر بالكامل.
قم بتمديد التخفيضات المتبقية مع تجنب إدخال الحبال الكبيرة. استبعاد إدخالات الحبال من منطقة الفصل A / S فقط عندما يسمح هذا الاستبعاد بعينة A / S كبيرة بما يكفي للتوصيفات التجريبية. استمر في فصل طبقات A/S وF/V باستخدام تقنيات الفرك والسحب المستخدمة في الزاوية الأولى.
توقف عن فصل الأنسجة على الفور إذا تشكل تمزق أو ثقب. لمنع التقاط الملقط ، ضع المقص في أي ثقب يتشكل واقطع الأنسجة بعيدا عن المركز. إذا تشكل العيب على طول التماس الانفصال ، فابدأ في فصل الأنسجة على طول حافة أخرى.
ابحث عن الوصلات بين الطبقات التي قد تظهر عند فصل الأنسجة ومنع المزيد من فصل الأنسجة. لاحظ أن هذه خيوط رقيقة ولكنها قوية يجب قطعها بعناية باستخدام المقص. تجنب إنشاء ثقب في طبقة A / S أو القطع لأسفل في طبقة F / V.
استمر في هذه العملية حتى يتم فصل أكبر عينة ممكنة من طبقة A / S. ضع علامة على اتجاه العينة باستخدام القلم الجراحي. أخيرا ، قم بقطع التماس للفصل لحافة الأنسجة المتبقية باستخدام المقص.
ضع الطبقة المركبة A / S المنفصلة بشكل مسطح على حصيرة القطع. إذا لزم الأمر ، استخدم المشرط لتصويب حواف الأنسجة وإنشاء شكل نسيج مربع مناسب للاختبار الميكانيكي ثنائي المحور. ضع طبقة A / S في ماء DI حتى تصبح جاهزة للاختبار.
ضع علامة على اتجاه طبقة F/V التي تبقى على لوح الشمع. اقطع أكبر مربع ممكن من المنطقة التي تمت فيها إزالة طبقة A / S. ثم ضعه في ماء DI.
تحقق التحليل النسيجي للنشرة السليمة والطبقتان التشريحيتان مما إذا كان النسيج مفصولا بشكل صحيح على طول الحدود بين الإسفنج والليف. تم استخدام الصور المجهرية لعلم الأنسجة لتحديد سمك طبقة الأنسجة وكسور الكتلة المكونة باستخدام برنامج ImageJ. أنتج الاختبار الميكانيكي الذي يتم التحكم فيه بالإزاحة وما بعد المعالجة توتر الغشاء مقابل بيانات التمدد للنشرة الأمامية للصمام ثلاثي الشرف ، والنشرة الخلفية للصمام ثلاثي الشرف ، ونشرة حاجز الصمام ثلاثي الشرف ، والتي تصف السلوك الميكانيكي غير الخطي للأنسجة.
أسفرت بيانات تصوير مجال التردد المكاني المستقطب عن خرائط ملونة لاتجاه ألياف الكولاجين ودرجة التباين البصري. على وجه التحديد ، قدمت خرائط الألوان هذه فهما شاملا لبنية ألياف الكولاجين عبر عينة الأنسجة بأكملها. من المهم ملاحظة أن الطبقة المركبة تتقلص بمجرد فصلها عن الأنسجة المثبتة.
اجمع أكبر عينة ممكنة لضمان وجود أنسجة كافية للاختبار اللاحق.
