This work was supported by a Project for Private Universities: matching fund subsidy from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology (MEXT) of Japan (T.I.) and Grants-in-Aid for Scientific Research (C) from MEXT (S.T. and K.N).

تمت الموافقة على البروتوكولات واستخدام حيوانات التجارب رعاية الحيوان واستخدام اللجان المؤسسية في جامعة ياماناشي وجامعة واسيدا. وقد أجريت رعاية الحيوان وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. 1. إعداد CPEC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الأجهزة والمواد التالية: المجهر ستيريو، ويفضل أن يكون قادرا على نقل الإضاءة من الأسفل. زوج من ملقط ساعاتي (دومون # 3 أو رقم 4)، تعقيم اللهب، مقص التشغيل على التوالي، تعقيم اللهب. اثنين العقيمة أطباق 10 سم من البلاستيك تحتوي على 20 مل الجليد الباردة يبوفيتش L-15 متوسطة. أطباق أسفل الزجاج 35 ملم يحتوي على 2 مل RT يبوفيتش L-15 متوسطة. كوب 100 مل تحتوي على 70٪ من الإيثانول. الجراء الماوس حديثي الولادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لفترة وجيزة تزج ماوس الأطفال حديثي الولادة في 70٪ من الإيثانول والموت ببطء بسرعة عن طريق قطع الرأس باستخدام مقص التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رئيس الفور في الجليد الباردة يبوفيتش L-15 متوسطة في العقيمة 10 سم ديش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الجلد من calvaria باستخدام زوج من ملقط ساعاتي، وقطع فتح الجمجمة لفضح الدماغ، ومن ثم قطع الأعصاب القحفية لعزل الدماغ كله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الدماغ على طبق جديد يحتوي على الجليد الباردة يبوفيتش L-15 متوسطة ومراقبة تحت المجهر ستيريو، والتأكد من أن الدماغ هو مغمورة تماما في المتوسط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين الجانب الظهري من المخ مواجهة، وتوجيه الدماغ بحيث بصيلات الشم الموجودة في الموضع 03:00 (للأشخاص اليد اليمنى). عقد الدماغ بلطف مع ملقط في اليد اليسرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط تشريح غرامة (دومون # 3 أو رقم 4) في اليد اليمنى، وقطع الجسم الثفني وتحت لحمة يربط بين نصفي الكرة المخية، وعلى طول الشق الطولي للمخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع بلطف نصفي الكرة المخية بعيدا إلى الجانبين الجانبية وفضح الشق الدماغي عرضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل نصفي الكرة الأرضية عن طريق معسر من عشرالبريد حمة بين نصف الكرة الأرضية والمهاد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب للخارج برفق الجانبية الضفيرة المشيمية البطين أن تعلق على الجانب الوحشي من الحصين من قبل affixa الصفيحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الضفيرة المشيمية معزولة إلى 35 مم طبق زجاج القاع التي تحتوي جديدة يبوفيتش L-15 متوسطة، وتراكب على وزن (قائمة المواد) بلطف لعقد الأنسجة في المكان. </li></ol> 2. تصوير لايف CPEC سيليا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكيد الأشعة فوق البنفسجية السليم (UV) ومرشح الاستدلال (IR) قطع (ق) لمنع يتم إدراج ضوء أقصر من 400 نانومتر، وأطول من 700 نانومتر، والتي محايدة الكثافة (ND) مرشحات (25٪ و 6٪) في مسار الضوء المجهر المقلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط بؤرة العدسة الشيئية تقريبا بالعين، ومن ثم ضبط مكثف بحيث الوسط والتركيز لتتماشى مع إضاءة كوهلر. إدراج المقابل تدخل الفرق المناسب (DIC) موشور، وهو عنصر مدينة دبي للإنترنت، وكذلك محلل والمستقطب العناصر في ليمسار GHT لتتوافق مع البصريات DIC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط تباين الرأي موقف المنشور DIC ذلك أن هيكل سطح النسيج هو الأكثر تميزا. إذا كان كل أهداب الخلايا المستهدفة هي متحركة، رؤية واضحة للأهداب متحركة لا يمكن الحصول عليها عن طريق العين بسبب حركتهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير مسار الضوء لكاميرا الفيديو، وإزالة مرشحات ND لزيادة قوة الضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الكاميرا في وضع التركيز على ضبط مجال الرؤية والتركيز. خلال التركيز، حيث يتم عرض صور الفيديو في الوقت الحقيقي على شاشة العرض، ورؤية واضحة للأهداب متحركة غير متوفر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الكاميرا في 200 هرتز مع ومدة التعرض من 0.1 مللي ثانية للفترة المطلوبة (ثواني إلى دقائق). بعد الحصول على صورة كومة، والأطر واحد عرض هياكل الهدبية واضحة. إذا حواف الهدبية غير واضحة، وزيادة معدل الإطار أو استخدام وقت التعرض أقصر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل حركة CPEC أهداب داخل 25-60 دقيقة بعد القتل الرحيم في يبوفيتشL-15 متوسطة. </li></ol> 3. تحليل الهدبية الحركة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتبع يدويا بفوزه على أنماط من كل هدب على شاشة الكمبيوتر. علامة مواقف الهدبية طرف في كل إطار مع مؤشر الماوس، التي يتم تجميعها للحصول على معلومات مسار كل هدب. أما تحليل المعلومات مساره باستخدام نفس البرنامج أو تصديرها إلى تطبيقات أخرى أكثر عمومية لمزيد من التحليل. يوصف كفاءة هذه الخطوة التحليل في مناقشة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصنيف مسارات إلى وضعين للحركة، ذهابا وإيابا أو التناوب، من خلال العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب التردد الهدبية الضرب (البرازيلي) باستخدام الصيغة التالية: [الاتحاد البرازيلي = (عدد الإطارات في الثانية) / (متوسط ​​عدد الإطارات للفوز واحد)] 14، والتي يمكن الحصول عليها من رسم تخطيطي الهدبية طرف الحركة (الشكل 3 ). كرر هذه العملية الحسابية لعدة دورات الهدبية الضرب، لأن الأهداب الأخرى على نفس الخلية يمكن أن تتداخل مع حركة كل ciliuم، مما أدى إلى عدم انتظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل التوحيد الزاوي للالهدبية الضرب محاور داخل خلية واحدة، وتحديد θ زاوية الضرب لكل مسار (الشكل 4). لمسارات ذهابا وإيابا، تناسب المواقف من طرف أهداب إلى خط مستقيم، وتحديد θ كما زاوية خط يجعل مع x -axis. لمسارات التناوب، وتناسب المواقف إلى القطع الناقص، وتحديد θ كما زاوية محور رئيسي من القطع الناقص يجعل مع x -axis. ووصف تفاصيل المناسب في القسم ممثل النتائج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوصف كمي لكل مسار، وحساب المعمم نسبة الارتفاع AR. لفترة وجيزة، وتناوب على مسار من قبل - θ وتحديد AR كما النسبة بين الاعراض من التوزيع على طول س - و-axes ص (الشكل 4B). وترد التفاصيل في القسم ممثل النتائج، وتفسيروأهميتها، وصفت القيود المفروضة على والمعلمة في مناقشة. </li></ol> 4. إعداد نموذج لSEM ملاحظة: SEM هو طريقة مهمة لتقييم وضع أهداب على CPECs بطريقة شاملة. لإعداد العينات للSEM، أفاد الإجراء القياسي السابق 15 يعمل مع تعديلات طفيفة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل تشريح الأنسجة من الدماغ، وإعداد تثبيتي في قنينة زجاجية 5 مل مع غطاء البولي ايثيلين. يتكون تثبيتي من 2٪ امتصاص العرق، 2.5٪ غلوتارالدهيد (نصف حل Karnovsky ل16) في 0.1 م العازلة الفوسفات، ودرجة الحموضة 7.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح خارج أنسجة من المخ كما هو موضح في الخطوة 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف لفترة وجيزة الأنسجة المعزولة مع محلول ملحي متوازن هانك (HBSS) في طبق جديد ثم إصلاح الأنسجة في تثبيتي في قارورة زجاجية لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. استخدام ماصات نقل المتاح والتعامل مع العينات جنرال الكتريكntly. بعد الشطف في HBSS، وتصبح الأنسجة لزجة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لنقل العينات إلى حل تثبيتي، وطرد ببطء على كمية صغيرة من محلول يحتوي على الأنسجة من ماصة نقل بمثابة قطرة وإضافة إلى تثبيتي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التثبيت، تجاهل تثبيتي، وشطف الأنسجة مع العازلة الفوسفات ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزج النسيج في محلول السكروز 10٪ لتغسل الألدهيدات المتبقية. لضمان القضاء الكامل على الألدهيدات، تزج العينات في حل لمدة 10 دقيقة ثم كرر مرتين مع السكروز النقي 10٪. هذه الخطوة مهمة لتحقيق الصحيح بعد التثبيت في الخطوات اللاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزج النسيج في محلول 1٪ رباعي أكسيد الأوزميوم في المخزن الفوسفات لمدة 30 دقيقة ثم ضع على الجليد لمرحلة ما بعد التثبيت. الحكم على درجة من المعاملة بالأوزميك من لون عينة: عندما تتم إزالة الألدهيدات تماما، وعينة سوداء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الأنسجة عينات ثابتة آخر على نطاق واسع مع مقطر مزدوجد الماء عدة مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى العينات عن طريق الغمر في تركيزات متدرجة من الإيثانول، عادة 65٪، 75٪، 85٪، 95٪، 99٪، و 100٪، لمدة 10 دقيقة لكل منهما. الحصول على الايثانول اللامائي من خلال وضع المناخل الجزيئية إلى 99.5٪ من الإيثانول من زجاجة شراؤها حديثا. تكرار الجفاف مع اللامائية الإيثانول ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع العينات المجففة في خلات الأميل، كاشف استبدال لتجفيف نقطة حرجة، لمدة 10 دقيقة. كرر هذه الخطوة مرتين. هذا كاشف يتبخر بسرعة ويمكن أن تصبح العينة الجافة، مما أدى إلى تدمير التوتر السطحي. ولذلك، لا تجف العينة تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تبادل النهائي من خلات الأميل، وإزالة معظم المذيبات، وعلى الفور التفاف قارورة زجاجية مفتوحة مع رقائق الألومنيوم، ووضع قنينة على الثلج الجاف. باستخدام إبرة أو ملقط غرامة، وجعل عدة ثقوب في احباط تغطية الفم من القارورة، بحيث يتدفق ثاني أكسيد الكربون السائل بسهولة إلى القارورة في مجفف نقطة حرجة. انتقل إلى الخطوة التاليةباسرع ما يمكن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذه الخطوة، والتقليل من المرحل من خلات الأميل في الغرفة مجفف، ولكن لا تدع العينة تجف تماما قبل التجفيف نقطة حرجة. وبالإضافة إلى ذلك، لا تترك العينة على الثلج الجاف لفترة طويلة دون داع لتجنب تشكيل الصقيع على القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل قوارير زجاجية ملفوفة احباط تحتوي على عينات الأنسجة إلى مجفف نقطة الأهمية بمكان أن يضمن بنية سطح الأنسجة لا تزال سليمة في حين إزالة المياه الوارد في الأنسجة. يمكن الحصول على معلومات مفصلة عن تشغيل مجفف نقطة حرجة من تعليمات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعامل مع العينات بعناية باستخدام المسواك لتقليل الأضرار الميكانيكية. ينتج عن ذلك من عينات الأنسجة المجففة هشة. جبل العينات على بذرة المعادن ومعطف مع الذهب والبلاديوم استخدام تفل أيون. </li></ol> 5. مراقبة من قبل SEM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة من قبل SEM وتسجيل الصور مع كاميرا رقميةمجهزة لالمجهر الإلكتروني الماسح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل بيانات الصور الرقمية إلى جهاز كمبيوتر لتحليلها. </li></ol>

<ol>
	<li>Nonami, Y., Narita, K., Nakamura, H., Inoue, T., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+ciliary+motility+on+choroid+plexus+epithelial+cells+during+the+perinatal+period.">Developmental changes in ciliary motility on choroid plexus epithelial cells during the perinatal period.</a> Cytoskeleton. 70 (12), 797-803 (2013).</li><li>Bisgrove, B. W., Yost, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+cilia+in+developmental+disorders+and+disease.">The roles of cilia in developmental disorders and disease.</a> Development. 133 (21), 4131-4143 (2006).</li><li>Fliegauf, M., Benzing, T., Omran, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+cilia+go+bad:+cilia+defects+and+ciliopathies.">When cilia go bad: cilia defects and ciliopathies.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 8 (11), 880-893 (2007).</li><li>Oh, E. C., Katsanis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+in+vertebrate+development+and+disease.">Cilia in vertebrate development and disease.</a> Development. 139 (3), 443-448 (2012).</li><li>Shah, A. S., Ben-Shahar, Y., Moninger, T. O., Kline, J. N., Welsh, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motile+cilia+of+human+airway+epithelia+are+chemosensory.">Motile cilia of human airway epithelia are chemosensory.</a> Science(New York, N.Y). 325 (5944), 1131-1134 (2009).</li><li>Kiprilov, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cells+in+culture+possess+primary+cilia+with+hedgehog+signaling+machinery).">Human embryonic stem cells in culture possess primary cilia with hedgehog signaling machinery).</a> The Journal of Cell Biology. 180 (5), 897-904 (2008).</li><li>Hirokawa, N., Tanaka, Y., Okada, Y., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nodal+flow+and+the+generation+of+left-right+asymmetry.">Nodal flow and the generation of left-right asymmetry.</a> Cell. 125 (1), 33-45 (2006).</li><li>Narita, K., Kozuka-Hata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+multiple+primary+cilia+reveals+a+novel+mode+of+ciliary+development+in+mammals.">Proteomic analysis of multiple primary cilia reveals a novel mode of ciliary development in mammals.</a> Biology Open. 1 (8), 815-825 (2012).</li><li>Takeda, S., Narita, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+vertebrate+cilia,+towards+a+new+taxonomy.">Structure and function of vertebrate cilia, towards a new taxonomy.</a> Differentiation; Research in Biological Diversity. 83 (2), S4-S11 (2012).</li><li>Ikegami, K., Sato, S., Nakamura, K., Ostrowski, L. E., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubulin+polyglutamylation+is+essential+for+airway+ciliary+function+through+the+regulation+of+beating+asymmetry.">Tubulin polyglutamylation is essential for airway ciliary function through the regulation of beating asymmetry.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (23), 10490-10495 (2010).</li><li>Foster, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+ciliary/flagellar+beating+of+Chlamydomonas.">Analysis of the ciliary/flagellar beating of Chlamydomonas.</a> Methods in Cell Biology. 91, 173-239 (2009).</li><li>Lechtreck, K. -. F., Sanderson, M. J., Witman, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+digital+imaging+of+ependymal+cilia+in+the+murine+brain.">High-speed digital imaging of ependymal cilia in the murine brain.</a> Methods in Cell Biology. 91, 255-264 (2009).</li><li>Okada, Y., Hirokawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+nodal+cilia+movement+and+measurement+of+nodal+flow.">Observation of nodal cilia movement and measurement of nodal flow.</a> Methods in Cell Biology. 91, 265-285 (2009).</li><li>Chilvers, M. A., Rutman, A., O&#8217;Callaghan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+beat+pattern+is+associated+with+specific+ultrastructural+defects+in+primary+ciliary+dyskinesia.">Ciliary beat pattern is associated with specific ultrastructural defects in primary ciliary dyskinesia.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 112 (3), 518-524 (2003).</li><li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Left-right+asymmetry+and+kinesin+superfamily+protein+KIF3A:+new+insights+in+determination+of+laterality+and+mesoderm+induction+by+kif3A-/-+mice+analysis.">Left-right asymmetry and kinesin superfamily protein KIF3A: new insights in determination of laterality and mesoderm induction by kif3A-/- mice analysis.</a> The Journal of Cell Biology. 145 (4), 825-836 (1999).</li><li>Karnovsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+formaldehyde-glutaraldehyde+fixative+of+high+osmolarity+for+use+in+electron+microscopy.">A formaldehyde-glutaraldehyde fixative of high osmolarity for use in electron microscopy.</a> The Journal of Cell Biology. 27, 137-138A (1965).</li></ol>

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة. تهدف هذه الورقة إلى تقديم التقارير منهجية مفصلة لمراقبة الحركة من أهداب في الأنسجة الضفيرة المشيمية معزولة. وقد تم الإبلاغ عن المستجدات العلمية في الدراسات السابقة 1،8.

وجهات النظر هذه الطريقة على الرغم من أن تقنية الموضحة هنا لا تقدم تحليلا أكثر تفصيلا للأهداب من الطرق التي تم نشرها مسبقا، وأهمية هذه التقنية تكمن في بساطة النظام والفعالية من حيث التكلفة، والتي يمكن تطبيقها بسهولة على فحص أي نوع من الحركة الهدبية خارج الحي. على وجه الخصوص، TI طاولة العمل يوفر واجهة بسيطة وسهلة الاستعمال تمكن الباحثون إلى رصد وتحليل الهدبية الحركة أكثر سهولة. لم يتم وضعها فعالة طرق تتبع الآلي للكائنات التباين المنخفض مثل أهداب غير ملوثين في محسنة الفيديو على النقيض من مدينة دبي للإنترنت. على الرغم من أن طريقة لتتبع الحركة الهدبية هو دليل في هذه التقنية، وعلى النحو الأمثل خفضت مقارنة مقدار الجهد في الهدبية تحليل تتبع الحركة باستخدام حزم البرامج للأغراض العامة لتحليل الصور. عينة تشريح لإعداد البريدس الجسم الحي CPEC العينات، التلاعب السريعة ورقيقة ضرورية للحفاظ على حيوية الأنسجة، والتي تضمن الحركة من أهداب خارج الحي. بسبب التلوث الكريات الحمراء يطمس مجال المراقبة، ويوصى بشدة الشطف لطيف ولكن معقدة من أنسجة تشريح مع الفوسفات مخزنة المالحة. لتجنب النزيف، يجب الحرص على تجنب تمزق الشريان الخلفي المشيمية التي يمكن تحديدها على أنها تشبه موضوع المحمر هيكل بارزة انضمت إلى الصفيحة المثبتة من الضفيرة الغروانية. مجهر مجهر مقلوب مجهزة البصريات DIC ونقل مصدر الضوء عالية الطاقة أمر ضروري لهذا الأسلوب. لأن مصابيح الزئبق وعادة ما تكون في كثير من الأحيان غير قادرة على تبديل وخارجها، ومصراع أمام السكن مصباح ضروري. إما مصراع اليدوي أو الكهربائي يمكن أن تستخدم لهذا الغرض. لحماية العينات وعيون الاب المراقبالأشعة فوق البنفسجية أوم وضوء الأشعة تحت الحمراء، يطلب من المرشحات الضوئية للسماح للضوء المرئي فقط (400-700 تمرير الفرقة أو مزيج من الأشعة فوق البنفسجية والأشعة تحت الحمراء قطع مرشحات). فلاتر ND ضرورية لتغيير السلطة الخفيفة التي تختلف وفقا للحالة أيضا: رصد من العين، مع التركيز مع كاميرا الفيديو، وعالية السرعة لتسجيل مرور الزمن. عدسة موضوعية مع فتحة عددية عالية ضرورية لدقة عالية. هناك بعض المسافة بين الجزء العلوي من ساترة والنقطة المحورية بسبب التشكل وسمك الأنسجة. لذلك، يفضل عدسة الغمر بالماء بدلا من عدسة غمر النفط لتحسين جودة الصورة. الاهتزاز العزلة ضرورية أيضا لانتاج مستقرة مداخن صورة. الهواء شاحنة من نوع الجداول مفيدة لهذا الغرض، ولكن توسيد أبسط المجهر عن طريق إدخال كرات التنس تحت قاعدة المجهر مع جدول ثابت قد تعمل أيضا. كاميرا فيديو كاميرا CCD قادرة على في مرجةشارع 200 لقطة / ثانية ضروري لتتبع حركة الأهداب. خلال العقد الماضي، أصبحت كاميرات CCD مع أسرع معدلات الإطار من (25-30 هرتز) معدل الفيديو القياسية المتوفرة تكاليف أقل بكثير. نماذج الكاميرا قادرة على أقصر الأوقات فضح من الإطار الزمني مفيدة للحد من عدم وضوح بسبب حركة أهداب دون زيادة كمية البيانات. ومدة التعرض من 0.1 ميللي ثانية، والإطار الزمني 5 مللي ثانية (200 هرتز) الحد الأدنى من الشروط للحصول على صور الهدبية من CPECs ذات جودة كافية. البرمجيات تحليل لتتبع حركة كل هدب هو مضيعة للوقت، وخصوصا عندما تستخدم العامة حزم البرامج غرض تحليل الصور لتتبع كل طرف الهدبي. الحد من الخطوات من المهام المتكررة، مثل النقر بالماوس على موقف الهدبية طرف على الشاشة، واختيار قائمة لتسجيل موقف النقر عليها، والنقر على زر للانتقال إلى القادم إطار الصورة، والنتائج في إعادة هامةالدرفلة الجديد من الوقت والجهد. في هذه الدراسة، تمت إضافة روتين خاص لبرنامج TI منضدة مصنوعة خصيصا. في وضع تتبع الهدبية من البرنامج TI طاولة العمل، وتبقي المستخدم على حلقات بسيطة عملية من خطوتين التالية: تحريك مؤشر الماوس إلى الحافة الهدبية والضغط على مفتاح السهم على لوحة المفاتيح للمضي قدما في الإطار، والتي لا تتطلب تحريك مؤشر الماوس أو عيني المستخدم لتحويل (إلى القوائم والأزرار الموجودة على شاشة الكمبيوتر) من النصائح الهدبية على شاشة الكمبيوتر. البرنامج بتتبع المواقع طرف الهدبية، يعرض مسار المسجلة لمساعدة المستخدم، وبإنشاء جدول المعلومات الهدبية الحركة لمزيد من التحليل. معظم برامج عامة لتحليل الصور يسمح وحدات الماكرو برمجة لتجهيز دفعة من هذه المهام المتكررة. ويوصى بشدة مثل هذه برمجة مخصصة للحد من الخطوات المتكررة. تحليل مسارات استخراج trajectoriوفاق نفذت باستخدام برنامج TI منضدة حسب الطلب، كما هو موضح أعلاه. وأجريت تحليل بسيط نسبيا ومعالجة الصور أيضا باستخدام نفس البرنامج. للتحليلات المناسب، تم نقل مسار كل طرف الهدبية لايغور برو البرمجيات. يمكن أيضا غيرها من برامج التحليل المتقدمة مثل MATLAB أن تستخدم لهذا الغرض. في الدراسة الحالية، بسبب صعوبات في تصنيف مسارات إلى ذهابا وإيابا أو مسارات التناوب، تم تصنيف مسارات بالعين بطريقة أعمى، والتي تم تأكيدها من قبل مراقب آخر، مما أدى إلى تصنيف ثابت. ومع ذلك، فإن أكثر صرامة رياضيا تدابير لتصنيف مسارات دون أي تعسف من الممكن أن يكون الأفضل. القطع الناقص تركيب مسارات يبدو أن المثل الأعلى، والتي يمكن قياس مدى الإهليليجية باعتباره نسبة الجانب من القطع الناقص المجهزة () في كلا ذهابا وإيابا، والحركات الدورانية. لكن، كانت محاولة لاستخدام توزيع نسبة الارتفاع إلى تحديد قيمة الحد الأدنى لتصنيف غير فعالة. تركيب غالبا ما فشلت لمسارات ذهابا وإيابا، في كثير من الأحيان فشل المعلمات أن تتلاقى، وكان من المناسب المتقاربة يبدو صعب المنال. ولذلك، لم يعتمد تركيب القطع الناقص لتصنيف تلقائيا مسارات أو قياس الإهليليجية كل مسار. وجرى تركيب خارج لاستخراج الاتجاه الضرب من النصائح تتحرك بالتناوب كمحور رئيسي من القطع الناقص المجهزة. في الدراسة الحالية، واقترح AR لقياس درجة أن ينحرف مسار من الخطية مثالية ذهابا وإيابا الحركة. المعلمة هي نسبة عرض توزيع عمودي على اتجاه الضرب إلى أن طول اتجاه. يجب أن تكون القيمة صفر عندما المسار هو خط مستقيم، واحدة عندما المسار هو دائرة، تشبه نسبة أبعاد القطع الناقص المذكورة أعلاه. في الممارسة العملية، والحصول على قيمة AR يمكن أن يكون سهلا نسبيا من خلال تناوب مسار، بحيث يصبح الاتجاه الضرب الموازي إلى x -axis (الشكل 4B). هذا الكمي يؤدي إلى قيم واضحة إلى حد كبير عن وضعي للحركة، مما يشير إلى إمكانية استخدام المعلمة ليس فقط لتحديد خصائص كل مسار، ولكن أيضا لتصنيف أكثر صرامة مسارات. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن الاتجاه الضرب في حد ذاته هو بالفعل نتيجة لعمليات تركيب متميزة عن وضعي في الطريقة الحالية. مزيد من التحسن في التحليل، مثل خوارزمية تركيب أكثر تقدما، قد يحل مشاكل من الممكن التعسف. ومن الجوانب المتعلقة الإهليليجية من مسار هو أن الضرب من كل هدب CPEC لا يجوز تجري في طائرة عمودية بدقة ه - و </م&gt; طائرة المراقبة. في الواقع، تعني نتائج SEM التصوير التي CPEC أهداب غالبا ما يميل، وقد يؤدي الميل إلى الإهليليجية واضح أو تباين في المسارات. استعدادا لSEM أثناء الإعداد لمراقبة SEM، هناك العديد من النقاط الهامة التي تضمن الحصول على صور ذات جودة عالية. لأول مرة، بعد تثبيت من قبل رباعي أكسيد الأوزميوم يجب إجراء بعناية، بما في ذلك ما قبل الغسيل بمحلول السكروز 10٪. دون تثبيت الصحيح قبل إجراء المعاملة بالأوزميك، يمكن للخطوات اللاحقة لا تحافظ على أو استعادة حالة من العينات، مما يؤدي إلى انخفاض جودة إعداد. لأن مثبتات ألدهيد والحد من وكلاء، أي الألدهيدات المتبقية ضمن العينة تمنع نشاط رباعي أكسيد الأوزميوم، كاشف مؤكسدة قوية. لضمان القضاء على الألدهيدات زائدة في العينات، غسل حذرا مع محلول السكروز أمر حتمي. في حالات بو الأمثلST-التثبيت، لا يغير لون عينة من البني إلى الأسود. ثانيا، يجب أن يكون حجم رباعي أكسيد الأوزميوم ما لا يقل عن 50 أضعاف أكبر من أن العينة. خلاف ذلك، لا يمكن توقع تثبيت كافية. ثالثا، من المهم تجنب جفاف كامل للعينات، ولا سيما خلال عملية الجفاف الذي يستخدم الإيثانول النقي للغاية وخلات الأميل. تجفيف العينة يدمر البنى السطحية الدقيقة مثل أهداب، مما أدى إلى الصور الفقيرة.

Cilia are hair-like projections on the surface of most vertebrate cells, which have attracted attention by medical researchers because of a class of diseases termed ciliopathies2&#8211;4. Despite the ubiquitous expression of the organelle, a wide variety of ciliary functions have been reported, including motility and biosensing. For example, motile cilia on the mucoepithelial surface transport mucus5 and epithelial debris to the outlet of tracts, thereby preventing disease by clearing the surface of epithelia. Moreover, during early developmental periods and embryonic stages, cilia regulate the proliferation of stem cells6, and are involved in the determination of left&#8211;right asymmetry of the vertebrate body7. 
Choroid plexus epithelial cells (CPECs) are derivatives of neuroepithelial cells that cover the surface of the choroid plexus tissue in the brain, which play important roles in maintaining homeostasis of the intracranial environment by production of cerebrospinal fluid (CSF). It has been previously demonstrated that CPECs have multiple non-motile cilia that regulate the production of CSF through G-protein-coupled receptors that are specifically concentrated on the cilia8. Although these cilia had been regarded as quiescent non-motile cilia, it was discovered that some CPEC cilia exhibit transient motility during the neonatal period1. This finding was quite important because it revealed that so-called non-motile cilia are not necessarily immotile from the beginning of development and might display transient motility during specific time windows, possibly in response to specific physiological demands and functions9. To precisely describe the motile nature of CPEC cilia, it is necessary to develop an ex vivo observation system that encompasses analysis of the kinetic profiles unique to CPEC cilia. 
With respect to motility, although several technical reports have described observations of the motile cilia of the tracheal epithelium5,10, motile single-cell flagella11, so-called conventional motile cilia12, and nodal cilia13, detailed analytical methods applicable to relatively undulated structures such as the choroid plexus have not been well documented so far. Moreover, a high time resolution is required to analyze the ciliary movement of CPECs, in which expensive high-speed cameras are indispensable. To circumvent this necessity and simplify monitoring the ciliary motility of various cell types, a low cost, high-speed camera has been introduced, and an easily accessible and convenient method to record the motility of motile cilia, especially to describe the speed and pattern of motion of each cilium, has been developed1. Moreover, original image analysis software &#8220;TI Workbench&#8221; has been used here to facilitate detailed analysis of motility. Collectively, this method provides a new concise strategy to analyze ciliary motion together with correlative scanning electron microscopy (SEM), which can be adopted in a wide range of cilium research.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>for both live imaging and SEM preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereo microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flat paper towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#934;10-cm plastic dish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-mL beaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>straight operating scissors</td>
			<td>Sansyo</td>
			<td>S-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>watchmaker forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>No.DU-3 or -4, INOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for live cell imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bottom dish</td>
			<td>Matsunami Glass</td>
			<td>D110300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for SEM preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alminum foil</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-mL glass vial with a polyethylene cap</td>
			<td>Nichiden Rika-Glass</td>
			<td>PS-5A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>transfer pipette</td>
			<td>Samco Scientific</td>
			<td>SM251-1S</td>
			<td>for specimen tranfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>toothpick</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for specimen transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ion sputter with gold-palladium</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>E-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>critical point dryer</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>HCP-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for live cell imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 W mercury lump housing and power supply</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>U-ULH and BH2-RFL-T3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 W mercury lamp</td>
			<td>Ushio</td>
			<td>USH103D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DIC condenser, n.a. 0.55</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX-LWUCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrrical shutter</td>
			<td>Vincent Associates</td>
			<td>VS35S22M1R3-24 and VMM-D1</td>
			<td>manual shutter can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>band-pass filter (400-700 nm, &#934;45 mm)</td>
			<td>Koshin Kagaku</td>
			<td>C10-110621-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ND filter (&#934;45 mm)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>45ND6, 45ND25</td>
			<td>combination of 25% and 6% ND filters are used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>objective lens (water immersion) with DIC element</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UApo 40XW/340, n.a., 1.15 with IX-DPAO40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-speed video camera</td>
			<td>Allied Vision Technologies</td>
			<td>GE680</td>
			<td>&#62;= 200 Hz frame rate and 1 msec expose time</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>image acquisition / analysis software</td>
			<td>in-hous software</td>
			<td>TI Workbench</td>
			<td>capable of acquisition at high frame rates.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC for camera control / analysis</td>
			<td>Apple</td>
			<td>Mac Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vibration isolation table</td>
			<td>Meiritsu Seiki</td>
			<td>AD0806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>weight for tissue</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>slice anchor kits</td>
			<td>It can be made with nylon mesh glued to a U-shape squashed &#934;0.5mm platinum wire.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for SEM</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scanning electron microscope</td>
			<td>JEOL</td>
			<td>JSM-6510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for live cell imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol&#160;</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>057-00456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz L-15 medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11415-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for SEM preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol&#160;</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>057-00456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1040051000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glutaraldehyde&#160;</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>17003-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoamyl acetate</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>02710-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Sieves 4A 1/8&#160;</td>
			<td>Wako Chemicals</td>
			<td>130-08655</td>
			<td>for preparation of anhydrous ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffer, 0.1 M</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To make 100 ml, mix 19.0 ml of 0.1 M NaH2PO4 and 81.0 ml of 0.1 M Na2HPO4&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monosodium phosphate (dihydrate)</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>31718-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disodium phosphate (anhydrous)</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>31801-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>suclose</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>30406-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>osmium tetroxide</td>
			<td>Nisshin EM</td>
			<td align="right">300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dry ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

observation of the ciliary movement of choroid plexus epithelial cells ex vivo

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. Choroid plexus epithelial cells (CPECs) covering the surface of choroid plexus tissue harbor multiple unique cilia, but most of the functions of these cilia remain to be investigated. To uncover the function of CPEC cilia with particular reference to their motility, an ex vivo observation system was developed to monitor ciliary motility during embryonic, perinatal and postnatal periods. The choroid plexus was dissected out of the brain ventricle and observed under a video-enhanced contrast microscope equipped with differential interference contrast optics. Under this condition, a simple and quantitative method was developed to analyze the motile profiles of CPEC cilia for several hours ex vivo. Next, the morphological changes of cilia during development were observed by scanning electron microscopy to elucidate the relationship between the morphological maturity of cilia and motility. Interestingly, this method could delineate changes in the number and length of cilia, which peaked at postnatal day (P) 2, while the beating frequency reached a maximum at P10, followed by abrupt cessation at P14. These techniques will enable elucidation of the functions of cilia in various tissues. While related techniques have been published in a previous report1, the current study focuses on detailed techniques to observe the motility and morphology of CPEC cilia ex vivo.

ويظهر لمحة عامة عن سير العمل في الشكل 1، بما في ذلك الصور من الأجهزة. ملاحظات الحركة الحية من CPECs فيلم 1 يظهر الفيلم من CPECs معزولة عن ماوس فترة ما حول الولادة، وفيلم 2 يبين وجهة نظر موسعة من الصور في الفيلم 1. وتجدر الإشارة إلى أن نصائح الهدبية الفردية هي أقل وضوحا في الصور الثابتة مقارنة مع تلك الموجودة في الأفلام. ويبين الشكل 2 تتبع حركة أهداب مع اثنين من وسائط مختلفة من الحركة، ذهابا وإيابا، والحركات الدورانية، من البيانات الواردة في أفلام 1 و 2. ويبين الشكل 3 تحليل بسيط من مسارات أهداب، الذي فرق الطور في الإحداثيات اثنين هو واضح في حركة دورانية. تحليل CPEC مسارات الهدبية طرف دي<html> ويبين طرق الذيل لتحليل كمي كل مسار في الشكل (4) مع الرسوم التوضيحية التخطيطي التعاريف زاوية الضرب θ (A) والرسم البياني التحليل مع نتائج ممثلة (B). لتحديد زاوية θ الضرب لمسارات ذهابا وإيابا، تناسب المواقف من طرف الهدبية خلال دورات متعددة إلى خط مستقيم ص = الفأس + ب، وتحديد الاتجاه الضرب على الوجه الذي على طول الخط المجهزة. تحديد زاوية الضرب هنا كما θ = قوس تان. لأن الخط المناسب غالبا ما يفشل في انتزاع الاتجاه في حالات الحركة الدورانية، تناسب مسارات دوران لقطع ناقص، وتحديد الاتجاه كما أن طول محور طويل من القطع الناقص المجهزة. بتعبير أدق، يتم تركيبها في مواقع طرف (س، ص) خلال دورات الضرب متعددة إلى وظيفة أدناه. 1.JPG &quot;العرض =&quot; 310 &quot;/&gt; أين <img alt="المعادلة 2" fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/52991/52991eq2.JPG" width="200" /> ويشمل تركيب القطع الناقص خمس معلمات المناسب: س 0، ص 0، أ، ب، وθ. س - والإحداثيات -spatial ص من مركز القطع الناقص هي س 0 و y 0، على التوالي. كعبرة الأكبر والأصغر من القطع الناقص هي أ و ب، على التوالي. زاوية θ هي الزاوية أن محور رئيسي يجعل مع س -axis، أو زاوية الضرب. ويرد التمثيل التخطيطي من هذه المعلمات في اللوحة اليمنى من الشكل 4A. ويتم تركيب خارج باستخدام ايغور برو البرمجيات من خلال تحديد وظيفة واضحة هو موضح أعلاه. ثم، رسم بياني لضرب زاوية θ لجميع أهداب مراقبةيتم رسم د في نفس الخلية كما رسم بياني دائري (الشكل 2 في مطار ناريتا وآخرون. 8). وتيرة تطبيع لعدد من النصائح الهدبية تحليلها. تجدر الإشارة إلى أن يتم تفسير كل هدب أن يكون اثنين من θ القيم في الرسم البياني دائري، مثل π / 4 و 3π / 4، مما يؤدي إلى توزيع متماثل من الاتجاه. لتحديد المعمم نسبة الارتفاع AR، يتم تدوير المناصب من طرف الهدبية خلال دورات متعددة - θ (الشكل 4B). وفقا لمبدأ التناوب، سواء ذهابا وإيابا، ومسارات دوران تصبح توزيع حوالي موازية لس -axis، التي الاعراض من توزيع ألف وباء، وعلى طول X- و y محاور، على التوالي، وتعرف بأنها نصف الفرق بين الحد الأدنى والحد الأقصى. لذلك، هذه المعايير هي أكثر ملاءمة للكعبرة الأكبر والأصغر من القطع الناقص، أ و ب. AR ثم يتم تعريفها على أنها النسبة بين A و B التي كتبها AR = B / A. ملاحظات المشيمية الضفيرة ظهارة بواسطة SEM SEM يسمح بملاحظة بنية سطح ناعم من العينات. وأكدت وجود أهداب على CPECs طوال الوقت التنموي. لوحظ ظهور أهداب متعددة على CPECs بعد يوم الجنينية (E) 13، بعد وقت قصير من بدء تطوير المشيمية الضفيرة في البطينات الجانبية حول E11. في هذه المرحلة، وخلايا صغيرة مع مظهر غير ناضجة متغير، ونصائح الهدبية تشير نحو مختلف الاتجاهات. في E15، يتم تأسيس خصلة من أهداب متعددة على رأس السطح القمي، والتي يقف خارجا من زغيبات المحيطة بها. في يوم ما بعد الولادة (P) 2، يتم إصلاح العديد من أهداب في موقف عازمة، مما يعكس الحركة الهدبية التي لاحظها التصوير الحي. في P14، معظم الخلايا تمتلك أهداب المتعددة التي هي غير متحركة وكذلك زغيبات ث<html> إيث نسيج دقيقة مقارنة مع المراحل السابقة. الشكل 5 معارض الصور SEM من CPECs مع أهداب في هذه المراحل. بناء على الأفلام هو مبين في الشكل (1) والفيلم 1، فمن الواضح أن أهداب متحركة يتم التعرف بسهولة عن طريق التصوير الحي. ومع ذلك، فإنه من الصعب التمييز بين أهداب غير متحركة بواسطة DIC المجهري. ونتيجة لذلك، SEM أمر لا غنى عنه لفهم الدول الهدبية الشاملة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52991/52991fig1.jpg" /> الشكل 1: لمحة عامة عن سير العمل (أ) مجهر ستيريو. (ب) مجهر مقلوب مجهزة بجهاز اتهم الديناميكي (CCD) الكاميرا. (ج) شاشة الكمبيوتر أثناء التحليل. (د) ايون تفل. (ه) عينة لSEM. (و) الضوئي المجهر الالكتروني. فيلم 1.pload / 52991 / Figure_2.mov &quot;الهدف =&quot; _ فارغة &quot;&gt; الفيلم من وجهة نظر العلوي من CPECs وأهداب من الجرو P2 الماوس في فيديو عالي السرعة المجهري. ونظرا لعدم انتظام سطح الأنسجة المشيمية الضفيرة، تحتوي هذه اللقطة . على حد سواء في التركيز والطائرات خارج نطاق التركيز يتم توسيع منطقة في منطقة الجزاء، ويظهر في الفيلم 2 شريط مقياس: 2 ميكرون. فيلم 2. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52991/Figure_3.mov" target="_blank">الفيلم من وجهة نظر الموسع لعينة الأنسجة في الفيلم 1.</a> أظهر الضرب أهداب الحركات إما التناوب أو ذهابا وإيابا. شريط النطاق: 1 ميكرون. <img alt="الرقم 4" src="/files/ftp_upload/52991/52991fig4.jpg" /> الشكل 2: إعادة تشكيل مسار CPEC أهداب من الوقت الفاصل بين الصور في الفيلم 2 (A) سيليا مع حركة ذهابا وإيابا (أعلى) وحركة دورانية (القاع). مدينة دبي للإنترنت<html> وتعرض صور من بيانات الفيلم في 50 ميللي ثانية فترات (1-8، شريط النطاق: 1 ميكرون). يشار إلى موقف من طرف الهدبية الهدف عن طريق رأس السهم. ومضافين (B) ومسارات (كسر خط) ومواقف نصائح الهدبية (دوائر ملونة) هو مبين في الصور. <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/52991/52991fig5.jpg" /> يتم عرض وضعين من حركة CPEC الهدبية طرف تشكيلها من بيانات الفيلم الممثل حركات الهدبية طرف، وحركة ذهابا وإيابا (A) وحركة دورانية (B)، عبر دورات متعددة كما مسارات (أعلى والحانات على نطاق و: الرقم 3. 0.5 ميكرون). يتم رسم الدورات وقت X- و y الإحداثيات للموقف طرف، على التوالي (وسط). للتدليل على بعد مرحلة التحول بين الإحداثيات اثنين، كانت X- و y الإحداثيات تطبيع [-1،1] ومضافين (أسفل، وخطوط حمراء وزرقاء، على التوالي). igure 6 &quot;SRC =&quot; / ملفات / ftp_upload / 52991 / 52991fig6.jpg &quot;/&gt; الرقم 4: الرسوم التوضيحية تخطيطي واصفا تحليل الهدبية مسارات طرف (A) تعاريف زاوية θ الضرب لذهابا وإيابا (اللوحة اليسرى) والتناوب (اللوحة اليمنى) مسارات. ، يتم عرض المعلمات في صيغة تصف القطع الناقص المجهزة، أ، ب، س 0، و y 0 في اللوحة اليمنى. (B) تدفق الرسم البياني التحليل المناسب من مسارات لتحديد θ زاوية الضرب وAR. يتم عرض النتائج الفعلية لتركيب مسارات التمثيلية في لوحات اليمين. <img alt="الرقم 7" src="/files/ftp_upload/52991/52991fig7.jpg" /> الشكل 5: SEM صورة أهداب. الميكروسكوب SEM تمثيلية من CPECs في E13، E15، P2، وP14. وخلال الوقت، ازداد CPECs في الحجم، وضعت microviLLI وأهداب على سطح القمي. خصلة من أهداب في E13 هي حتى الآن للحصول على الحركة. في P2، عندما بلغت نسبة أهداب مع حركية أعلى نقطة، لوحظ العديد من أهداب منحنية. في P14، أهداب تفقد القدرة على الحركة. شريط النطاق: 5 ميكرون.

Watch this Scientific Journal Video about Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo at JoVE.com

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

In this study, a detailed light microscopic technique was optimized for real-time observation and analysis of the motion of CPEC cilia ex vivo together with an electron microscopic method for ultrastructural analysis.

مراقبة الحركة الهدبية من الخلايا المشيمية الضفيرة طلائي<em&gt; السابقين فيفو</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

observation-ciliary-movement-choroid-plexus-epithelial-cells-ex

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

12.1K Views.  Waseda University. In this study, a detailed light microscopic technique was optimized for real-time observation and analysis of the motion of CPEC cilia ex vivo together with an electron microscopic method for ultrastructural analysis.

Video: Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

Herpes keratitis is one of the most severe pathologies associated with the herpes simplex virus-type 1 (HSV-1). Herpes keratitis is currently the leading cause of both cornea-derived and infection-associated blindness in the developed world. Typical presentation of herpes keratitis includes infection of the corneal epithelium and sometimes the deeper corneal stroma and endothelium, leading to such permanent corneal pathologies as scarring, thinning, and opacity 1.
Corneal HSV-1 infection is traditionally studied in two types of experimental models. The in vitro model, in which cultured monolayers of corneal epithelial cells are infected in a Petri dish, offers simplicity, high level of replicability, fast experiments, and relatively low costs. On the other hand, the in vivo model, in which animals such as rabbits or mice are inoculated directly in the cornea, offers a highly sophisticated physiological system, but has higher costs, longer experiments, necessary animal care, and a greater degree of variability. 
In this video article, we provide a detailed demonstration of a new ex vivo model of corneal epithelial HSV-1 infection, which combines the strengths of both the in vitro and the in vivo models. The ex vivo model utilizes intact corneas organotypically maintained in culture and infected with HSV-1. The use of the ex vivo model allows for highly physiologically-based conclusions, yet it is rather inexpensive and requires time commitment comparable to that of the in vitro model.

Ex Vivo Organotypic Corneal Model of Acute Epithelial Herpes Simplex Virus Type I Infection

In this video article we describe the use of a new ex vivo model of acute herpes simplex virus type I corneal epithelial infection.

خارج الحي النموذجي القرنية عضوي النمط من الهربس البسيط من النوع الحاد طلائي الفيروسات I العدوى

Herpes keratitis is one of the most severe pathologies associated with the herpes simplex virus-type 1 (HSV-1).  Herpes keratitis is currently the leading ...

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity to normally innocuous stimuli1. Hyperalgesia and allodynia have been studied in many different rodent models of diabetes mellitus2. However, as stated by B&ouml;lcskei et al, determination of "pain" in animal models is challenging due to its subjective nature3. Moreover, the traditional methods used to determine behavioral responses to noxious thermal stimuli usually lack reproducibility and pharmacological sensitivity3. For instance, by using the hot-plate method of Ankier4, flinch, withdrawal and/or licking of either hind- and/or fore-paws is quantified as reflex latencies at constant high thermal stimuli (52-55 &deg;C). However, animals that are hyperalgesic to thermal stimulus do not reproducibly show differences in reflex latencies using those supra-threshold temperatures3,5. As the recently described method of B&ouml;lcskei et al.6, the procedures described here allows for the rapid, sensitive and reproducible determination of thermal nociceptive thresholds (TNTs) in mice and rats. The method uses slowly increasing thermal stimulus applied mostly to the skin of mouse/rat plantar surface. The method is particularly sensitive to study anti-nociception during hyperalgesic states such as PDN. The procedures described bellow are based on the ones published in detail by Alm&aacute;si et al 5 and B&ouml;lcskei et al 3. The procedures described here have been approved the Laboratory Animal Care and Use Committee (LACUC), Wright State University.

Here, we describe a rapid reliable and simple procedure to determine the lowest temperature at which rats or mice show nocifensive behavior, i.e. the thermal nociceptive threshold (TNT). This method applies a slowly increasing thermal stimulus allowing precise and reproducible estimation of TNTs with minimum, if any, stress to the animals.

سريع تحديد العتبة Nociceptive الحرارية في الفئران المصابة بمرض السكر

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for investigating the cell biology and development of central brain structures by allowing acute pharmacological interventions and live imaging of cellular processes. As an example of the technique, prior work from our lab1 has shown that a previously unrecognized subcellular compartment lies between the axonal and somatodendritic compartments of axons of the Drosophila central brain. The development of this compartment, referred to as the axon initial segment (AIS)2, was shown genetically to depend on the neuron-specific cyclin-dependent kinase, Cdk5. We show here that ex vivo treatment of wild-type Drosophila larval brains with the Cdk5-specific pharmacological inhibitors roscovitine and olomoucine3 causes acute changes in actin organization, and in localization of the cell-surface protein Fasciclin 2, that mimic the changes seen in mutants that lack Cdk5 activity genetically.
A second example of the ex vivo culture technique is provided for remodeling of the connections of embryonic mushroom body (MB) gamma neurons during metamorphosis from larva to adult. The mushroom body is the center of olfactory learning and memory in the fly4, and these gamma neurons prune their axonal and dendritic branches during pupal development and then re-extend branches at a later timepoint to establish the adult innervation pattern5. Pruning of these neurons of the MB has been shown to occur via local degeneration of neurite branches6, by a mechanism that is triggered by ecdysone, a steroid hormone, acting at the ecdysone receptor B17, and that is dependent on the activity of the ubiquitin-proteasome system6. Our method of ex vivo culturing can be used to interrogate further the mechanism of developmental remodeling. We found that in the ex vivo culture setting, gamma neurons of the MB recapitulated the process of developmental pruning with a time course similar to that in vivo. It was essential, however, to wait until 1.5 hours after puparium formation before explanting the tissue in order for the cells to commit irreversibly to metamorphosis; dissection of animals at the onset of pupariation led to little or no metamorphosis in culture. Thus, with appropriate modification, the ex vivo culture approach can be applied to study dynamic as well as steady state aspects of central brain biology.

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

This article describes a method by which one can mimic in vivo development of the Drosophila mushroom body in an ex vivo culture system.

السابقين التثقيف المجراة من الجامعة، تطوير الأمخاخ ذبابة الفاكهة

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain proper, that support forebrain function. They are the cerebral surface (superficial) vasculature along with associated meninges (MAV) and the choroid plexus which are necessary for cerebral blood flow and cerebrospinal fluid (CSF) homeostasis. The tissue harvested is suitable for biochemical and physiological analysis, and the MAV has been shown to be sensitive to damage produced by amphetamine and hyperthermia 1,2. As well, the major and minor cerebral vasculatures harvested in MAV are of potentially high interest when investigating concussive types of head trauma. The MAV dissected in this presentation consists of the pial and some of the arachnoid membrane (less dura) of the meninges and the major and minor cerebral surface vasculature. The choroid plexus dissected is the structure that resides in the lateral ventricles as described by Oldfield and McKinley3,4,5,6. The methods used for harvesting these two tissues also facilitate the harvesting of regional cortical tissue devoid of meninges and larger cerebral surface vasculature, and is compatible with harvesting other brain tissues such as striatum, hypothalamus, hippocampus, etc. The dissection of the two tissues takes from 5 to 10 min total. The gene expression levels for the dissected MAV and choroid plexus, as shown and described in this presentation can be found at GSE23093 (MAV) and GSE29733 (choroid plexus) at the NCBI GEO repository. This data has been, and is being, used to help further understand the functioning of the MAV and choroid plexus and how neurotoxic events such as severe hyperthermia and AMPH adversely affect their function.

This video presentation shows a method of harvesting the two most important highly vascular structures that support forebrain function. They are the cerebral surface (superficial) vasculature along with associated meninges (MAV) and the choroid plexus which are necessary for cerebral blood flow and cerebrospinal fluid (CSF) homeostasis.

A وصف البصرية في تشريح الأوعية الدموية السطحية والسحايا الدماغي المقترن والضفيرة المشيمية من دماغ الفئران

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first neural circuit in the AOS pathway, called the accessory olfactory bulb (AOB), plays an important role in establishing sex-typical behaviors such as territorial aggression and mating. This small (&#60;1 mm3) circuit possesses the capacity to distinguish unique behavioral states, such as sex, strain, and stress from chemosensory cues in the secretions and excretions of conspecifics. While the compact organization of this system presents unique opportunities for recording from large portions of the circuit simultaneously, investigation of sensory processing in the AOB remains challenging, largely due to its experimentally disadvantageous location in the brain. Here, we demonstrate a multi-stage dissection that removes the intact AOB inside a single hemisphere of the anterior mouse skull, leaving connections to both the peripheral vomeronasal sensory neurons (VSNs) and local neuronal circuitry intact. The procedure exposes the AOB surface to direct visual inspection, facilitating electrophysiological and optical recordings from AOB circuit elements in the absence of anesthetics. Upon inserting a thin cannula into the vomeronasal organ (VNO), which houses the VSNs, one can directly expose the periphery to social odors and pheromones while recording downstream activity in the AOB. This procedure enables controlled inquiries into AOS information processing, which can shed light on mechanisms linking pheromone exposure to changes in behavior.

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory bulb (AOB) has been difficult to study in the context of sensory coding. Here, we demonstrate a dissection that produces an ex vivo preparation in which AOB neurons remain functionally connected to their peripheral inputs, facilitating research into information processing of mouse pheromones and kairomones.

فيفو السابقين الاستعدادات للالميكعي الجهاز سليمة والإكسسوار الشم لمبة

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Acute In Vivo Electrophysiological Recordings of Local Field Potentials and Multi-unit Activity from the Hyperdirect Pathway in Anesthetized Rats

Converging evidence shows that many neuropsychiatric diseases should be understood as disorders of large-scale neuronal networks. To better understand the pathophysiological basis of these diseases, it is necessary to precisely characterize in which way the processing of information is disturbed between the different neuronal parts of the circuit. Using extracellular in vivo electrophysiological recordings, it is possible to accurately delineate neuronal activity within a neuronal network. The application of this method has several advantages over alternative techniques, e.g., functional magnetic resonance imaging and calcium imaging, as it allows a unique temporal and spatial resolution and does not rely on genetically engineered organisms. However, the use of extracellular in vivo recordings is limited since it is an invasive technique that cannot be universally applied. In this article, a simple and easy to use method is presented with which it is possible to simultaneously record extracellular potentials such as local field potentials and multiunit activity at multiple sites of a network. It is detailed how a precise targeting of subcortical nuclei can be achieved using a combination of stereotactic surgery and online analysis of multi-unit recordings. Thus, it is demonstrated, how a complete network such as the hyperdirect cortico-basal ganglia loop can be studied in anesthetized animals in vivo.

Acute In Vivo Electrophysiological Recordings of Local Field Potentials and Multi-unit Activity from the Hyperdirect Pathway in Anesthetized Rats

In this study, the methodology is presented on how to perform multi-site in vivo electrophysiological recordings from the hyperdirect pathway under urethane anesthesia.

حاد<em&gt; في فيفو</em&gt; تسجيلات الكهربية للميكانيات الميدانية المحلية والنشاط متعدد الوحدات من مسار هيبيرديركت في الفئران تخدير

Converging evidence shows that many neuropsychiatric diseases should be understood as disorders of large-scale neuronal networks. To better understand the ...

Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

The electrical activity of cells in tissues can be monitored by electrophysiological techniques, but these are usually limited to the analysis of individual cells. Since an increase of intracellular calcium (Ca2+) in the cytosol often occurs because of the electrical activity, or in response to a myriad of other stimuli, this process can be monitored by the imaging of cells loaded with fluorescent calcium-sensitive dyes.&#160; However, it is difficult to image this response in an individual cell type within whole tissue because these dyes are taken up by all cell types within the tissue. In contrast, genetically encoded calcium indicators (GECIs) can be expressed by an individual cell type and fluoresce in response to an increase of intracellular Ca2+, thus permitting the imaging of Ca2+ signaling in entire populations of individual cell types. Here, we apply the use of the GECIs GCaMP3/6 to the mouse neuromuscular junction, a tripartite synapse between motor neurons, skeletal muscle, and terminal/perisynaptic Schwann cells. We demonstrate the utility of this technique in classic ex vivo tissue preparations. Using an optical splitter, we perform dual-wavelength imaging of dynamic Ca2+ signals and a static label of the neuromuscular junction (NMJ) in an approach that could be easily adapted to monitor two cell-specific GECI or genetically encoded voltage indicators (GEVI) simultaneously. Finally, we discuss the routines used to capture spatial maps of fluorescence intensity. Together, these optical, transgenic, and analytic techniques can be employed to study the biological activity of distinct cell subpopulations at the NMJ in a wide variety of contexts.

Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

Here we present a protocol to image calcium signaling in populations of individual cell types at the murine neuromuscular junction.

السابقين فيفو تصوير الكالسيوم الخاصة بالخلية إشارات في المشبك الثلاثية للحجاب الحاجز الماوس

The electrical activity of cells in tissues can be monitored by electrophysiological techniques, but these are usually limited to the analysis of ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the cerebellum. IO has long been proposed to be crucial for motor control and its activity is currently considered to be at the center of many hypotheses of both motor and cognitive functions of the cerebellum. While its physiology and function have been relatively well studied on single-cell level in vitro, presently there are no reports on the organization of the IO network activity in living animals. This is largely due to the extremely challenging anatomical location of the IO, making it difficult to subject to conventional fluorescent imaging methods, where an optic path must be created through the entire brain located dorsally to the region of interest.
Here we describe an alternative method for obtaining state-of-the-art -level calcium imaging data from the IO network. The method takes advantage of the extreme ventral location of the IO and involves a surgical procedure for inserting a gradient-refractive index (GRIN) lens through the neck viscera to come into contact with the ventral surface of the calcium sensor GCaMP6s-expressing IO in anesthetized mice. A representative calcium imaging recording is shown to demonstrate the feasibility to record IO neuron activity after the surgery. While this is a non-survival surgery and the recordings must be conducted under anesthesia, it avoids damage to life-critical brainstem nuclei and allows conducting large variety of experiments investigating spatiotemporal activity patterns and input integration in the IO. This procedure with modifications could be used for recordings in other, adjacent regions of the ventral brainstem.

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

We present a protocol to expose the brainstem of adult mouse from the ventral side. By using a gradient-refractive index lens with a miniature microscope, calcium imaging can be used to examine the activity of inferior olive neural somata in vivo.

في الجسم الحي تصوير الكالسيوم في الزيتون السفلي الماوس

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the ...

Ex Vivo Release of Calcitonin Gene-Related Peptide from the Trigeminovascular System in Rodents

Calcitonin gene-related peptide (CGRP) was first discovered in the 1980s as a splice variant from the calcitonin gene. Since its discovery, its role in migraine pathophysiology has been well established, first by its potent vasodilator properties and subsequently by its presence and function as a neurotransmitter in the sensory trigeminovascular system. The migraine-provoking ability of CGRP gave support to the pharma industry to develop monoclonal antibodies and antagonists inhibiting the effect of CGRP. A new treatment paradigm has proven effective in the prophylactic treatment of migraine. One of the useful tools to further understand migraine mechanisms is the ex vivo model of CGRP release from the trigeminovascular system. It is a relatively simple method that can be used with various pharmacological tools to achieve know-how to further develop new effective migraine treatments. The present protocol describes a CGRP release model and the technique to quantify the effect of pharmacological agents on the amount of CGRP released from the trigeminovascular system in rodents. A procedure describing the experimental approach from euthanasia to the measurement of protein levels is provided. The essential isolation of the trigeminal ganglion and the trigeminal nucleus caudalis from both mice and rats and the preparation of rat dura mater are described in detail. Furthermore, representative results from both species (rats and mice) are presented. The technique is a key tool to investigate the molecular mechanisms involved in migraine pathophysiology by using various pharmacological compounds and genetically modified animals.

Ex Vivo Release of Calcitonin Gene-Related Peptide from the Trigeminovascular System in Rodents

The present protocol describes the ex vivo calcitonin gene-related peptide (CGRP) release model and the strategy to quantify the effect of pharmacological agents on the amount of CGRP released from the trigeminovascular system in rodents.

إكس فيفو إطلاق الببتيد المرتبط بجين الكالسيتونين من نظام الأوعية الدموية الثلاثية في القوارض

Calcitonin gene-related peptide (CGRP) was first discovered in the 1980s as a splice variant from the calcitonin gene. Since its discovery, its role in ...

Preparation of Rat Sciatic Nerve for Ex Vivo Neurophysiology

Ex vivo preparations enable the study of many neurophysiological processes in isolation from the rest of the body while preserving local tissue structure. This work describes the preparation of rat sciatic nerves for ex vivo neurophysiology, including buffer preparation, animal procedures, equipment setup and neurophysiological recording. This work provides an overview of the different types of experiments possible with this method. The outlined method aims to provide 6 h of stimulation and recording on extracted peripheral nerve tissue in tightly controlled conditions for optimal consistency in results. Results obtained using this method are A-fibre compound action potentials (CAP) with peak-to-peak amplitudes in the millivolt range over the entire duration of the experiment. CAP amplitudes and shapes are consistent and reliable, making them useful to test and compare new electrodes to existing models, or the effects of interventions on the tissue, such as the use of chemicals, surgical alterations, or neuromodulatory stimulation techniques. Both conventional commercially available cuff electrodes with platinum-iridium contacts and custom-made conductive elastomer electrodes were tested and gave similar results in terms of nerve stimulus strength-duration response.

Preparation of Rat Sciatic Nerve for Ex Vivo Neurophysiology

This protocol describes the preparation of rat whole sciatic nerve tissue for ex vivo electrophysiological stimulation and recording in an environmentally-regulated, two-compartment, perfused saline bath.

تحضير العصب الوركي للفئران للفسيولوجيا العصبية خارج الجسم الحي

Ex vivo preparations enable the study of many neurophysiological processes in isolation from the rest of the body while preserving local tissue structure. ...