فإن الكتاب أود أن أشكر Qiuli انغ، مركز موارد اللغة، كلية كولبي، للمساعدة التقنية مع معالجة الفيديو واريك توماس، قسم الموسيقى، وكلية كولبي، لتقديم الموسيقى الخلفية. وقد أيد هذا المشروع من المنح المقدمة من المركز الوطني للبحوث الموارد، INBRE (P20RR016463-12)، المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة (P20 GM103423-12)، مواطني معاهد الصحة والعلوم قسم غرانت، كلية كولبي (STA). ودعمت JL وLWM من المنح المقدمة من صندوق إجابات الصيف، كلية كولبي.

1. ذبابة الفاكهة باغت التي يسببها الفحص الحركي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العلاج من تعاطي المخدرات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رزين لشل عدد الذكور البالغ المطلوب اليوم (حوالي 8-12) من 1-3 الذباب باستخدام CO 2 ونقلها إلى قارورة تحتوي على المواد الغذائية تستكمل المخدرات. ملاحظة: مخدر آخر مثل الأثير أو الجليد يمكن استخدامها لرزين الذباب لتمكين العد والمناولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للذباب للتعافي من التخدير لمدة 20 دقيقة (أو حتى الشفاء) مع القارورة في وضع أفقي (لمنع الذباب يعلقوا على الطعام) ثم ضع قارورة تستقيم في الظلام 12 ساعة، 12 ساعة ضوء الحاضنة عند 25 ° C للفترة المتبقية من التجربة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجريبية تعيين لأعلى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم هذا الإعداد قنينة مزدوج إلى ثلاثة أقسام متساوية من 6.33 سم عن طريق وضع دوائر حول قنينة مع علامة دائمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 3 أيام من التعرض للمخدرات، ونقل الذباب دون التخدير في قارورة القاع بسرعة ووضع القارورة أعلىخلال الافتتاح. الشريط قارورة اثنين معا مع الشريط واضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للذباب حتى يتأقلم مع البيئة الجديدة لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان قارورة على خلفية بيضاء واقامت كاميرا رقمية على مسافة مناسبة من الجهاز قنينة مزدوج مع جهاز توقيت في الرأي. ضمان الجهاز بأكمله مرئيا في إطار صورة واحدة وأن كل الذباب هي في التركيز. للحفاظ على إطارات متسقة بين التجارب، بمناسبة موقع الكاميرا وقنينة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفحص التنقل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض بوضوح عدد المحاكمة، العلاج من تعاطي المخدرات، والموقت في عرض الكاميرا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بحزم الاستفادة من جهاز قنينة المزدوج ضد كونترتوب 3 مرات والتأكد من أن جميع الذباب تقع في الجزء السفلي من القارورة. في وقت واحد بدء الموقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كل 5 ثانية لمدة 1 دقيقة، التقاط صورة من الجهاز. ملاحظة: بدلا من ذلك، شريط فيديو يمكن احتجازها وتوقف على فترات مناسبة لقياس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للذباب للتعافي دون عائق لمدة 1 دقيقة. </li><li&gt; كرر 2 مرات أكثر مع 1 دقيقة الانتعاش مرة بين كل محاكمة. ملاحظة: كل جهاز يجب أن تأخذ 5 دقائق لاستكمال جمع البيانات. الحفاظ على قوة مماثلة من التنصت بين التجارب. متعددة (3 على الأقل) جهاز يمكن التعامل معها بسهولة في وقت واحد. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استعراض الصور وتسجيل عدد من الذباب في كل قسم مع مرور الوقت. حساب النسبة المئوية من الذباب في كل قسم مع مرور الوقت. ملاحظات: كرر هذا الإجراء بأكمله مع نفس الذباب في 2 أو 3 نقاط زمنية من الفائدة، على سبيل المثال، يوم 3 و 5 و 7. إذا كان الكثير من الذباب يموت في كافة مراحل التجربة أنه من الممكن زيادة عدد محاكمة الأصلي للتعويض لفيات. استخدام التحليل الإحصائي المناسب لمقارنة البيانات. </li></ol></li></ol> 2. ذبابة الفاكهة العفوي تنقل الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الطعام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة 3 غرام من لحظة ذبابة الفاكهة المتوسطة مع 15 مل من الماء دي المتأينة وروتينون المطلوب(أو دواء آخر من الفائدة) الجرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد أن تصبح خليط المواد الغذائية شركة (حوالي 5 دقائق)، تحميل بعناية الطعام إلى ما يقرب من 1 سم ارتفاع في مصنع بتوريد أنابيب شفافة (5 ملم X 65 ملم). إضافة المخدرات التي غرست الغذائية للأنابيب عن طريق وضع بعناية الأنابيب عموديا في الغذاء والتواء لهم حتى يمكن إزالتها مع الغذاء داخل الأنبوب. ملاحظة: من المفيد وضع الاصبع على افتتاح أنبوب لخلق فراغ. فينبغي ألا يحتوي الغذاء أي فقاعات الهواء أو لديك سطح متفاوتة كما الذباب يمكن أن تصبح عالقة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإعداد التجريبي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع غطاء من البلاستيك على نهاية أنبوب أقرب الطعام. دفع غطاء من البلاستيك على أنبوب أقل قدر ممكن، كما أنه يمكن خلق فقاعة الهواء في القارورة إذا دفعت بقوة ل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رزين الذكور القديم يوم 1 الذباب باستخدام CO 2 وإدراج بعناية 1 الذكور تطير في كل أنبوب مع الفرشاة. كرر اعتمادا على عدد من التجارب المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سدنهاية أبعد من أنبوب الطعام مع كرة القطن الصغيرة، والتي يمكن أن تدحرجت ناحية من أكبر متجر اشترى كرات القطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للذباب للتعافي مع الأنابيب في وضع أفقي لمدة 15 دقيقة والتأكد من أن جميع الذباب حية ونشطة. إدراج أنابيب في DAM والتأكد من أن جميع الأنابيب في نفس الموقف بالنسبة إلى السد. ملاحظة: من الممكن وضعها مع مجال الرصد في منتصف القارورة، أو لدفع كل قارورة إلى جنب، بحيث يتم مراقبة نهاية أنبوب. ملاحظة: انظر لمناقشة الاختلافات على هذا الأسلوب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع السد في الظلام 12 ساعة، 12 ساعة ضوء مجموعة حاضنة إلى 25 درجة مئوية. ربط DAM لنظام جمع البيانات. فتح برنامج DAM وتحت تفضيلات حدد طول بن ل10 دقيقة. بدء جمع البيانات والسماح للبرنامج لجمع البيانات لمدة 7 أيام. ملاحظة: يمكن تعديل طول بن إذا لزم الأمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل البيانات ملاحظة: عمليةالبيانات للحصول على التهم لكل دقيقة كإجراء لتحرك عفوي على المدى الطويل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملف البيانات DAM مفتوحة البرنامج ورصد وصول المسح الضوئي بالضغط تحديد بيانات الإدخال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد نطاق رصد المناسب وحدد بن لطول فترات 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الناتج نوع الملف اختيار ملفات القناة. ترك كل الخيارات الأخرى الافتراضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر بيانات المسح الضوئي وحفظ إلى مجلد معين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيانات الاستيراد في الساعة البيولوجية برامج تحليل البيانات للحصول على التهم لكل دقيقة. ملاحظة: للحصول يستخدم Clocklab برامج تحليل البيانات عادة. خيارات أخرى متوفرة أيضا. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Olanow, C. W., Tatton, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+pathogenesis+of+Parkinson's+disease.">Etiology and pathogenesis of Parkinson's disease.</a> Annual review of neuroscience. 22, 123-144 (1999).</li><li>Coulom, H., Birman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+exposure+to+rotenone+models+sporadic+Parkinson's+disease+in+Drosophila+melanogaster.">Chronic exposure to rotenone models sporadic Parkinson's disease in Drosophila melanogaster.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 24, 10993-10998 (2004).</li><li>Hosamani, R., Ramesh, S. R., Muralidhara, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+of+rotenone-induced+mitochondrial+oxidative+damage+and+neurotoxicty+in+Drosophila+melanogaster+supplemented+with+creatine.">Attenuation of rotenone-induced mitochondrial oxidative damage and neurotoxicty in Drosophila melanogaster supplemented with creatine.</a> Neurochemical research. 35, 1402-1412 (2010).</li><li>Islam, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neuroprotective+role+of+the+human+uncoupling+protein+2+(hUCP2)+in+a+Drosophila+Parkinson's+disease+model.">A neuroprotective role of the human uncoupling protein 2 (hUCP2) in a Drosophila Parkinson's disease model.</a> Neurobiology of disease. 46, 137-146 (2012).</li><li>Lawal, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+vesicular+monoamine+transporter+reduces+pesticide-induced+loss+of+dopaminergic+neurons.">The Drosophila vesicular monoamine transporter reduces pesticide-induced loss of dopaminergic neurons.</a> Neurobiology of. 40, 102-112 (2010).</li><li>St Laurent, ., O'Brien, R., M, L., Ahmad, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+butyrate+improves+locomotor+impairment+and+early+mortality+in+a+rotenone-induced+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">Sodium butyrate improves locomotor impairment and early mortality in a rotenone-induced Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Neuroscience. 246, 382-390 (2013).</li><li>Sherer, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+toxicity+in+rotenone+models+of+Parkinson's+disease.">Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23, 10756-10764 (2003).</li><li>Munoz-Soriano, V., Paricio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+Parkinson's+disease:+discovering+relevant+pathways+and+novel+therapeutic+strategies.">Drosophila models of Parkinson's disease: discovering relevant pathways and novel therapeutic strategies.</a> Parkinson's disease. , 520640 (2011).</li><li>Steffan, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+deacetylase+inhibitors+arrest+polyglutamine-dependent+neurodegeneration+in+Drosophila.">Histone deacetylase inhibitors arrest polyglutamine-dependent neurodegeneration in Drosophila.</a> Nature. 413, 739-743 (2001).</li><li>Auluck, P. K., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+prevention+of+Parkinson+disease+in+Drosophila.">Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila.</a> Nature medicine. 8, 1185-1186 (2002).</li><li>Whitworth, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glutathione+S-transferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">Increased glutathione S-transferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 8024-809 (2005).</li><li>Ahmad, S. T., Steinmetz, S. B., Bussey, H. M., Possidente, B., Seggio, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+ethanol+exposure+alters+free-running+circadian+rhythm+and+per+Locus+transcription+in+adult+D.+melanogaster+period+mutants.">Larval ethanol exposure alters free-running circadian rhythm and per Locus transcription in adult D. melanogaster period mutants.</a> Behavioural brain research. 241, 50-55 (2013).</li><li>Seggio, J. A., Possidente, B., Ahmad, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+ethanol+exposure+alters+adult+circadian+free-running+locomotor+activity+rhythm+in+Drosophila+melanogaster.">Larval ethanol exposure alters adult circadian free-running locomotor activity rhythm in Drosophila melanogaster.</a> Chronobiology international. 29, 75-81 (2012).</li><li>Chaudhuri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+genetic+and+environmental+factors+in+a+Drosophila+parkinsonism+model.">Interaction of genetic and environmental factors in a Drosophila parkinsonism model.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 2457-2467 (2007).</li><li>Feany, M. B., Bender, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">A Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Nature. 404, 394-398 (2000).</li><li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+locomotor,+learning,+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration.">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. , (2011).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).</li><li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+assay+Drosophila+behavior.">Methods to assay Drosophila behavior.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2012).</li><li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster.">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. , (2009).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

في هذه الدراسة، نحن تصف إجراءين لقياس كل من المدى الطويل تحرك عفوي وقصيرة المدى التي يسببها جفل تنقل في ذبابة الفاكهة نموذج الناجم عن روتينون من مرض باركنسون. يمكن للمرء أيضا قياس هذه الخصائص تنقل في الذباب المعرضة للعوامل الدوائية الأخرى المعروفة لنموذج باركن?...

أوجه القصور تنقل هي الأعراض الرئيسية لمرض الشلل الرعاش وسببه تدهور الخلايا العصبية الدوبامين في المادة السوداء 1. روتنون هو مبيد حشري كيتوني التي تمت دراستها على نطاق واسع لنموذج العجز الحركي باركنسون في ذبابة الفاكهة 2-6. روتنون يسبب الضرر التأكسدي عن طريق عرقلة المسار الفسفرة المؤكسدة، مما يؤدي في نهاية المطاف موت الخلية 7. الخلايا العصبية الدوبامين أكثر عرضة للتسمم روتينون، مما آثار المادة الكيميائية في المقام الأول المحرك تستند 2،7. عن طريق إحداث أعراض مرض باركنسون في الذباب، يمكننا فهم أفضل للمرض وعلاج أعراضه 6،8-11. يوفر ذبابة الفاكهة نموذجا جيدا لدراسة هذا التأثير لأنها لين العريكة وراثيا، وسهلة للحفاظ على، ولها دورة الحياة السريعة. وقد أظهرت العديد من الدراسات أن روتينون يسبب يسببها جفل الأجل القصيرتتم المحافظة على العيوب في تحرك الذباب ذبابة الفاكهة على الطعام، وعندما تستكمل روتينون، أنها تظهر استجابة geotactic أبطأ السلبية بعد الانبهار 2-6. فشلهم في تسلق صعودا في جهاز القارورة في أسرع وقت المحاكمات السيطرة يدل على تحرك العيوب التي يسببها جفل. تأثير روتينون على المدى الطويل، لا يتم وصف حركة عفوية أيضا. وقد استخدمت مراقبين نشاط ذبابة الفاكهة (السدود) بنجاح لرصد الحركة في ذبابة الفاكهة إيقاع الساعة البيولوجية يدرس 12،13. توضع الذباب في أنابيب الفردية، التي يتم تحميلها إلى DAM. وقد تم تجهيز هذا الجهاز مع جهاز استشعار الأشعة تحت الحمراء، التي بحساب عدد المرات ذبابة يكسر شعاع الأشعة تحت الحمراء. هذه التهم يمكن استخدامها كمقياس للتحرك دون عائق والنشاط 12،13. عن طريق وضع الذباب في DAM، يمكن وصف تأثير على روتينون من تحرك طويل الأجل. توضح هذه الدراسة طرق الاتفاقات البيئية المتعددة الأطرافالناجم عن جفل لدى عودتهم المدى القصير تحرك وتنقل عفوية على المدى الطويل من أجل فهم أفضل للآثار القصور الحركي روتينون بوساطة. توصيف القصور محاكاة تنقل مرض باركنسون مهمة لأنها تسمح لدراسة المركبات الأخرى التي قد عكس هذه العيوب الحركة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="628">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Standard narrow vials</td>
			<td style="width:127px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:119px;">32-120</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Rotenone</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">R8875</td>
			<td>Store in freezer, make fresh for each experiment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D8418</td>
			<td>Solvent for rotenone</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Instant Drosophila medium</td>
			<td style="width:127px;">Carolina Biological&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Formula 4-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Drosophila activity monitor (DAM)</td>
			<td style="width:127px;">Trikinetics</td>
			<td style="width:119px;">DAM2</td>
			<td>trikinetics.com</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">DAM tubes</td>
			<td style="width:127px;">Trikinetics</td>
			<td style="width:119px;">Tubes 5X65 mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Recipe for Rotenone +food (125 mM dose)</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Make 62.5 mM rotenone stock solution in DMSO by dissolving 25 mg rotenone in 1 ml DMSO&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For 125 mM dose, add 10 mM rotenone stock in DMSO to 5 ml water.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods to characterize spontaneous and startle-induced locomotion in a rotenone-induced parkinson's disease model of drosophila

مرض باركنسون هو اضطراب الاعصاب الذي ينجم عن تدهور الخلايا العصبية الدوبامين في الجهاز العصبي المركزي، وخاصة في المادة السوداء. يسبب هذا المرض النقص السيارات، التي تمثل وصلابة، والهزات، والخرف في البشر. روتنون هو الحشرات التي تسبب الضرر التأكسدي عن طريق تثبيط وظيفة سلسلة نقل الإلكترون في الميتوكوندريا. كما انها تستخدم لنمذجة مرض باركنسون في ذبابة الفاكهة. الذباب لديها استجابة geotactic السلبية الكامنة، مما يحملهم على تسلق صعودا يجري على الدهشة. وقد ثبت أن روتينون يسبب عيوب الوفيات وتنقل الأولى التي تعطل قدرة الذباب &quot;في الصعود بعد أن تم استغلالها أسفل. ومع ذلك، لا يتم توثيق تأثير روتينون على حركة عفوية أيضا. وتحدد هذه الدراسة اثنين حساسة، قابلة للتكرار، وفحوصات عالية الإنتاجية لوصف أوجه القصور الناجمة عن روتينون فيالناجم عن جفل المدى القصير تحرك وتنقل عفوية على المدى الطويل في ذبابة الفاكهة. هذه المقايسات يمكن تكييفها بسهولة لتوصيف نماذج ذبابة الفاكهة الأخرى من العيوب تحرك وفعالية العوامل العلاجية.

ذبابة الفاكهة باغت التي يسببها الفحص الحركي Wildtype، كانتون-S، أظهرت الذباب استجابة geotactic السلبية قوية مع فقط حوالي 88٪ و 5٪ من الذباب في الأجزاء العلوية والسفلية على التوالي، من جهاز مزدوج قارورة بعد 30 ثانية (ا...

Watch this Scientific Journal Video about Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila at JoVE.com

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

مرض باركنسون هو اضطراب الاعصاب الذي ينجم عن تدهور الخلايا العصبية الدوبامين في الجهاز العصبي المركزي، مما تسبب عيوب الحركة. نماذج روتنون مرض باركنسون في ذبابة الفاكهة. تلخص هذه الورقة اثنين المقايسات التي تميز أوجه القصور تنقل كل من العفوية والتي يسببها باغت الناجمة عن روتينون.

طرق لتوصيف التلقائي وباغت الناجم عن تحرك في نموذج مرض باركنسون الناجم عن روتنون من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Parkinson&#8217;s disease is a neurodegenerative disorder that results from the degeneration of dopaminergic neurons in the central nervous system, ...

methods-to-characterize-spontaneous-startle-induced-locomotion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

10.0K Views.  Colby College.  مرض باركنسون هو اضطراب الاعصاب الذي ينجم عن تدهور الخلايا العصبية الدوبامين في الجهاز العصبي المركزي، مما تسبب عيوب الحركة. نماذج روتنون مرض باركنسون في ذبابة الفاكهة. تلخص هذه الورقة اثنين المقايسات التي تميز أوجه القصور تنقل كل من ?...

Video: Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH
accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific
effective therapy. The autologous blood injection model in mice
involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal
ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The
response to hemorrhage can then be studied in vivo and the
neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the
ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The
procedure described in this protocol uses the double injection
technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no
anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space
and expandable tubing in the system.

The autologous blood injection model of intracerebral hemorrhage in mice described in this protocol uses the double injection technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space and expandable tubing in the system.

حقن الدم ذاتي النزيف الدماغي الداخلي النموذجي لالعفوي في الفئران

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.
The Drosophila larva is an established model system to study thermal nociception, a sensory response to potentially harmful temperatures that is evolutionarily conserved across species1,2. The advantages of Drosophila for such studies are the relative simplicity of its nervous system and the sophistication of the genetic techniques that can be used to dissect the molecular basis of the underlying biology4-6 In Drosophila, as in all metazoans, the response to noxious thermal stimuli generally involves a "nocifensive" aversive withdrawal to the presented stimulus7. Such stimuli are detected through free nerve endings or nociceptors and the amplitude of the organismal response depends on the number of nociceptors receiving the noxious stimulus8. In Drosophila, it is the class IV dendritic arborization sensory neurons that detect noxious thermal and mechanical stimuli9 in addition to their recently discovered role as photoreceptors10. These neurons, which have been very well studied at the developmental level, arborize over the barrier epidermal sheet and make contacts with nearly all epidermal cells11,12. The single axon of each class IV neuron projects into the ventral nerve cord of the central nervous system11 where they may connect to second-order neurons that project to the brain.
Under baseline conditions, nociceptive sensory neurons will not fire until a relatively high threshold is reached. The assays described here allow the investigator to quantify baseline behavioral responses or, presumably, the sensitization that ensues following tissue damage. Each assay provokes distinct but related locomotory behavioral responses to noxious thermal stimuli and permits the researcher to visualize and quantify various aspects of thermal nociception in Drosophila larvae. The assays can be applied to larvae of desired genotypes or to larvae raised under different environmental conditions that might impact nociception. Since thermal nociception is conserved across species, the findings gleaned from genetic dissection in Drosophila will likely inform our understanding of thermal nociception in other species, including vertebrates.

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.

المحلية والعالمية طرق تقييم Nociception الحرارية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar olfactory systems suggesting that the biological approach to chemical sensing has been optimized over evolutionary time1. In the insect olfactory system, odorants are transduced by olfactory receptor neurons (ORN) in the antenna, which convert chemical stimuli into trains of action potentials. Sensory input from the ORNs is then relayed to the antennal lobe (AL; a structure analogous to the vertebrate olfactory bulb). In the AL, neural representations for odors take the form of spatiotemporal firing patterns distributed across ensembles of principal neurons (PNs; also referred to as projection neurons)2,3. The AL output is subsequently processed by Kenyon cells (KCs) in the downstream mushroom body (MB), a structure associated with olfactory memory and learning4,5. Here, we present electrophysiological recording techniques to monitor odor-evoked neural responses in these olfactory circuits.
First, we present a single sensillum recording method to study odor-evoked responses at the level of populations of ORNs6,7. We discuss the use of saline filled sharpened glass pipettes as electrodes to extracellularly monitor ORN responses. Next, we present a method to extracellularly monitor PN responses using a commercial 16-channel electrode3. A similar approach using a custom-made 8-channel twisted wire tetrode is demonstrated for Kenyon cell recordings8. We provide details of our experimental setup and present representative recording traces for each of these techniques.

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust Schistocerca Americana Olfactory Circuits

We demonstrate variations of the extracellular multi-unit recording technique to characterize odor-evoked responses in the first three stages of the invertebrate olfactory pathway. These techniques can easily be adapted to examine ensemble activity in other neural systems as well.

طرق تسجيل متعددة الوحدات لوصف النشاط العصبي في الجراد (<em&gt; الجراد الصحراوي أمريكانا</em&gt;) الدوائر الشم

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival  of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

تحديد العفوي الحركي آخر في<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. Single-molecule imaging is gaining momentum as it provides exceptional access to the visualization of individual molecules in living cells. Here, we describe a technique that we developed to perform single-particle tracking photo-activated localization microscopy (sptPALM) in Drosophila larvae. Synaptic communication relies on key presynaptic proteins that act by docking, priming, and promoting the fusion of neurotransmitter-containing vesicles with the plasma membrane. A range of protein-protein and protein-lipid interactions tightly regulates these processes and the presynaptic proteins therefore exhibit changes in mobility associated with each of these key events. Investigating how mobility of these proteins correlates with their physiological function in an intact live animal is essential to understanding their precise mechanism of action. Extracting protein mobility with high resolution in vivo requires overcoming limitations such as optical transparency, accessibility, and penetration depth. We describe how photoconvertible fluorescent proteins tagged to the presynaptic protein Syntaxin-1A can be visualized via slight oblique illumination and tracked at the motor nerve terminal or along the motor neuron axon of the third instar Drosophila larva.

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

Here we illustrate how single molecule photo-activated localization microscopy can be carried out on the motor nerve terminal of a live Drosophila melanogaster third instar larva.

في فيفو تتبع في محطة Presynaptic الأعصاب الحركية المورفولوجية جزيء واحد

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. ...

Quantifying Spontaneous Ca2+ Fluxes and their Downstream Effects in Primary Mouse Midbrain Neurons

Parkinson&#8217;s disease (PD) is a devastating neurodegenerative disorder caused by the degeneration of dopaminergic (DA) neurons. Excessive Ca2+ influx due to the abnormal activation of glutamate receptors results in DA excitotoxicity and has been identified as an important mechanism for DA neuron loss. In this study, we isolate, dissociate, and culture midbrain neurons from the mouse ventral mesencephalon (VM) of ED14 mouse embryos. We then infect the long-term primary mouse midbrain cultures with an adeno-associated virus (AAV) expressing a genetically encoded calcium indicator, GCaMP6f under control of the human neuron-specific synapsin promoter, hSyn. Using live confocal imaging, we show that cultured mouse midbrain neurons display spontaneous Ca2+ fluxes detected by AAV-hSyn-GCaMP6f. Bath application of glutamate to midbrain cultures causes abnormal elevations in intracellular Ca2+ within neurons and this is accompanied by caspase-3 activation in DA neurons, as demonstrated by immunostaining. The techniques to identify glutamate-mediated apoptosis in primary mouse DA neurons have important applications for the high content screening of drugs that preserve DA neuron health.

Quantifying Spontaneous Ca2+ Fluxes and their Downstream Effects in Primary Mouse Midbrain Neurons

Here we present a protocol to measure in vitro Ca2+ fluxes in midbrain neurons and their downstream effects on caspase-3 using primary mouse midbrain cultures. This model can be employed to study pathophysiologic changes related to abnormal Ca2+ activity in midbrain neurons, and to screen novel therapeutics for anti-apoptotic properties.

قياس حجم عفوية Ca2 + التدفقات وآثارها المصب في الخلايا العصبية الماوس الأولية Midbrain

Parkinson&#8217;s disease (PD) is a devastating neurodegenerative disorder caused by the degeneration of dopaminergic (DA) neurons. Excessive Ca2+ influx ...

Applying the RatWalker System for Gait Analysis in a Genetic Rat Model of Parkinson's Disease

Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder caused by the loss of dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta. Gait abnormalities, including decreased arm swing, slower walking speed, and shorter steps are common in PD patients and appear early in the course of disease. Thus, the quantification of motor patterns in animal models of PD will be important for phenotypic characterization during disease course and upon therapeutic treatment. Most cases of PD are idiopathic; however, the identification of hereditary forms of PD uncovered gene mutations and variants, such as loss-of-function mutations in Pink1 and Parkin, two proteins involved in mitochondrial quality control that could be harnessed to create animal models. While mice are resistant to neurodegeneration upon loss of Pink1 and Parkin (single and combined deletion), in rats, Pink1 but not Parkin deficiency leads to nigral DA neuron loss and motor impairment. Here, we report the utility of FTIR imaging to uncover gait changes in freely walking young (2 months of age) male rats with combined loss of Pink1 and Parkin prior to the development of gross visually apparent motor abnormality as these rats age (observed at 4-6 months), characterized by hindlimb dragging as previously reported in Pink1 knockout (KO) rats.

Here we describe the RatWalker system, built by redesigning the MouseWalker apparatus to accommodate for the increased size and weight of rats. This system uses frustrated total internal reflection (FTIR), high-speed video capture, and open-access analysis software to track and quantify gait parameters.

تطبيق نظام RatWalker لتحليل المشي في نموذج الفئران الجيني لمرض باركنسون

Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder caused by the loss of dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased stereological counting is the standard for quantification of these cells, but it remains a laborious and time-consuming process, which may not be feasible for all projects. Here, we describe the use of an image analysis platform, which can accurately estimate the quantity of labeled cells in a pre-defined region of interest. We describe a step-by-step protocol for this method of analysis in rat brain and demonstrate it can identify a significant reduction in tyrosine hydroxylase positive neurons due to expression of mutant &#945;-synuclein in the substantia nigra. We validated this methodology by comparing with results obtained by unbiased stereology. Taken together, this method provides a time-efficient and accurate process for detecting changes in dopaminergic neuron number, and thus is suitable for efficient determination of the effect of interventions on cell survival.

Here we present an automated method for semi-quantitative determination of dopaminergic neuron number in the rat substantia nigra pars compacta.

تحديد شبه كمي لكثافة الخلايا العصبية الدوبامين في Substantia Nigra من نماذج القوارض باستخدام تحليل الصورة الآلي

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...

The 6-hydroxydopamine Rat Model of Parkinson's Disease

Motor symptoms of Parkinson's disease (PD)-bradykinesia, akinesia, and tremor at rest-are consequences of the neurodegeneration of dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta (SNc) and dopaminergic striatal deficit. Animal models have been widely used to simulate human pathology in the laboratory. Rodents are the most used animal models for PD due to their ease of handling and maintenance. Moreover, the anatomy and molecular, cellular, and pharmacological mechanisms of PD are similar in rodents and humans. The infusion of the neurotoxin, 6-hydroxydopamine (6-OHDA), into a medial forebrain bundle (MFB) of rats reproduces the severe destruction of dopaminergic neurons and simulates PD symptoms. This protocol demonstrates how to perform the unilateral microinjection of 6-OHDA in the MFB in a rat model of PD and shows the motor deficits induced by 6-OHDA and predicted dopaminergic lesions through the stepping test. The 6-OHDA causes significant impairment in the number of steps performed with the contralateral forelimb.

The 6-hydroxydopamine (6-OHDA) model has been used for decades to advance the understanding of Parkinson's Disease. In this protocol, we demonstrate how to perform unilateral nigrostriatal lesions in the rat by injecting 6-OHDA in the medial forebrain bundle, assess motor deficits, and predict lesions using the stepping test.

نموذج الفئران 6-هيدروكسي دوبامين لمرض باركنسون

Motor symptoms of Parkinson's disease (PD)-bradykinesia, akinesia, and tremor at rest-are consequences of the neurodegeneration of dopaminergic neurons in ...

طرق لتوصيف التلقائي وباغت الناجم عن تحرك في نموذج مرض باركنسون الناجم عن روتنون من

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

حقن الدم ذاتي النزيف الدماغي الداخلي النموذجي لالعفوي في الفئران

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

المحلية والعالمية طرق تقييم Nociception الحرارية في

طرق تسجيل متعددة الوحدات لوصف النشاط العصبي في الجراد (

تحديد العفوي الحركي آخر في

في فيفو تتبع في محطة Presynaptic الأعصاب الحركية المورفولوجية جزيء واحد

قياس حجم عفوية Ca^{2 +} التدفقات وآثارها المصب في الخلايا العصبية الماوس الأولية Midbrain

تطبيق نظام RatWalker لتحليل المشي في نموذج الفئران الجيني لمرض باركنسون

تحديد شبه كمي لكثافة الخلايا العصبية الدوبامين في Substantia Nigra من نماذج القوارض باستخدام تحليل الصورة الآلي

نموذج الفئران 6-هيدروكسي دوبامين لمرض باركنسون