وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من عصبي عضلي شراكة الأبحاث CIHR (JNM - 90959؛ إلى JAEB).

قبل استخدام هذا النموذج، يجب أن المحققين قد حصل على موافقة لبروتوكول الجراحية من استخدام الحيوانات مؤسستهم التي تحكم الجسم. تمت الموافقة على نموذج من الأخلاق مجلس البحوث، ومؤسسة علوم الصحة هاملتون، جامعة ماكماستر (سياسة الاستخدام المقبول # 10-04-24) ويتم تنفيذها وفقا صارمة مع توصيات المجلس الكندي للرعاية الحيوان. 1. إعداد الماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الماوس. لحث التخدير مع 5٪ isoflurane وأو 2٪ هالوثان. يجب على الدوائر الكهربية المستعملة ضمان نظافتها كافية من مخدر لحماية الجراح. بعد 2-3 دقائق تنفس الحيوان سيتباطأ. ضمان منعكس طرفة غائب وقرصة المسافات بين الأصابع في مخلب لتأكيد التخدير الجراحي (أي لم يكن هناك استجابة من الفأر). تطبيق مواد التشحيم العيون للعين، لمنع جفاف القرنية أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق الفخذ الجانبية والارداف من الوركيالى الشق الركبة وتطهير مع proviodine. سوف الحلاقة حفاظ على موقع من الشعر شق مجانية لضمان التصور الكافي للالجراحي الميداني وتقليل التدخل في تشريح الأعصاب وعانى من قطع. الشق الوركي، الذي هو أعلى والخلفي لعظم الفخذ، يمكن تحديدها عن طريق الجس. </li></ol> 2. إجراء المنطوق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقليل isoflurane والاستنشاق إلى 2٪ (هالوثان 1٪) ثم ضع الماوس على جانبها (الجانب المعدة للجراحة التي تواجه متابعة)، تحت مجهر التشغيل أو تشريح. وبدلا من ذلك يمكن إجراء الجراحة مع Loupes لالجراحية منذ التكبير 3.5X مرضية لشخص بالغ (20-25 ز) الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارتداء قفازات معقمة. تحديد الشق الوركي من قبل الجس. باستخدام مشرط، شق الجلد من الفخذ الجانبي من الشق الوركي إلى الركبة (حوالي 1 سم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنتشر بلطف على الجلد. التعرف على العضلة ذات الرأسين الفخذية، والذي هو عضلة مسطحة سطحية من الفخذ الجانبيةفورا تحت الجلد. باستخدام مقص غرامة، وتقسيم العضلة ذات الرأسين الفخذية على طول الألياف العضلية وعقد مفتوح مع ضام الربيع لفضح العصب الوركي وفروعه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعرف على العصب الوركي العميق على الفور إلى الفخذية ذات الرأسين. ويمكن التعرف عليه من قبل مميزة لونه أبيض لامع، وحوالي 0.8 ملم في القطر. يتم تشغيله من الشق الوركي إلى الركبة، المتفرعة في الأعصاب الظنبوب، الشظوي والربلي على مستوى المبأبضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل بلطف الظنبوب من فروع العصب الشظوي والربلي مع ملقط متناهية الصغر والربيع مقص microdissecting. العصب الظنبوب هو أكبر فرع وعادة ما تكون مركزية. فمن المهم عدم سحق العصب بينما تفصل بين الفروع. عقد العصب فقط على طبقة adventicial الخارجي مع ملقط متناهية الصغر، والحفاظ على الركود العصب (لا يدرس)، وسوف تجنب سحق العصبية وإصابة الجر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكاملة ودائمة denervatiعلى، قطع العصب قصبي مع microdissecting مقص وبشكل أقصى قدر ممكن، وتجنب بعناية السفن المأبضية. بدلا من ذلك، لإزالة التعصيب مؤقتة مع عودة التعصيب كاملة المتوقعة في 2-4 أسابيع، يمكن ببساطة أن سحق العصب قصبي مع ملقط متناهية الصغر لمدة 15 ثانية بدلا من مقطوع. (الأعصاب الطرفية تنمو بعد الاصابة وسوف reinnervate العضلات المستهدفة.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان المطلوب إزالة التعصيب كاملة، خياطة نهاية العصب قصبي مقطوع إلى السطح الأمامي للعضلة ذات الرأسين الفخذية مع 10-0 نايلون وإعادة الاقتراب من الفخذية ذات الرأسين مع 5-0 VICRYL لمنع الشاذة إعادة تعصيب من الساق و عضلات النعلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجلد مع تشغيل 5-0 خياطة VICRYL. </li></ol> 3. أضف الرعاية الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف مخدر الاستنشاق ولكن الحفاظ على تدفق الأكسجين. إدارة buprinorphine (أو بديل) مسكن تحت الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الماوس إلى قفص نظيفة مع عدم وجودالفراش في حين الاستيقاظ من التخدير. الحفاظ على بطانية الاحترار داخل القفص وتحت الملاحظة المباشرة حتى التجول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل ومنزل في قفص أسفل لينة (لا أسلاك) مع الفراش لينة وافرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد أطرافهم المنطوق اليومي لحالة من الجروح والقدم لتطوير القرحة كعب استلقاء أو أدلة على مضغ. يمكن أن تدار مشاكل بسيطة مع المضادات الحيوية الموضعية أو المطهرات مثل proviodine. مؤشرات نقطة النهاية التي تتطلب القتل الرحيم الحيوانية هي فقدان الوزن، ودليل على سوء الرعاية الذاتية (الفراء تكدرت)، والتقوس في الجلوس. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي التضحية الحيوانات مع انفتاح الجرح أو القرح الرئيسية التي لا تلتئم في 1-2 أسابيع مع المضادات الحيوية الموضعية أو تظهر لديهم الألم. </li></ol> 4. الساق مزالة العصب والعضلات النعلية الحصاد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نقطة زمنية ما بعد الجراحة المطلوب، تزن الماوس والتضحية مع CO 2 جرعة زائدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحلق الجانب الإنسي من كل منالمنطوق والساقين التحكم المقابل ونظيفة مع الكحول. ضع الماوس تحت مجهر التشغيل أو تشريح، أو استخدم بدلا من Loupes لعرض الجراحية لالتكبير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الطرف المنطوق، شق الجلد العجل وسطي مع مشرط من الكاحل إلى الركبة ومحيطي حول الكاحل. سحب بلطف الجلد مع ملقط قبالة العضلات وقريب نحو الفخذ. هذا يفضح كل عضلات الساق. تحديد عضلة الساق، والذي هو عضلة الساق الذي يمتد من الركبة إلى الكاحل على الجانب الخلفي من الساق وتقع مباشرة تحت الجلد. تحديد الإدراج البعيدة للعضلة ذات الرأسين الفخذية، الأقرب إلى عضلة الساق على الجانب الإنسي من الركبة. في الإدراج لها القاصي يظهر الفخذية ذات الرأسين رقيقة وغشائي ويعتلي الجزء الأكثر القريبة من الساق. باستخدام مقص حادة وتشريح نهاية، فصل بلطف الإدراج القاصي من الفخذية ذات الرأسين من الغازالعضلات trocnemius. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الإدراج لها القاصي في العقبي، وعضلة الساق التناقص التدريجي في وتر أخيل. التعرف على وتر أخيل، والتي تظهر أبيض وتري. عقد في وتر أخيل مع ملقط، مع الحرص على عدم عقد أو سحق عضلة الساق، وتقسيم وتر أخيل من الإدراج عقبي باستخدام مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ما زالت تحتجز في وتر، ورفع بلطف عضلة الساق (أحمر باهت) قبالة النعلية عميق (أعمق الحمراء)، من الإدراج القاصي نحو أصله عند الركبة (والنعلية يمكن أن تحصد بشكل منفصل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الساق قبالة المحطة بقسمة أصل الساق من chondyles عظم الفخذ الإنسي والجانبية باستخدام مقص. الجر لطيف جدا على العضلات يسهل هذه العملية. يجب الحرص على عدم سحق العضلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سوف النعلية يكون الآن مرئية بوضوح، على الفور تحت موقع من الساق. رفع النعلية من الإدراج على وتر أخيل ل، أوigin على العجل الخلفي. إذا تم رفع النعلية عن غير قصد مع الساق، فصل برفق من العينة المقطوع. على الساق (الضوء الأحمر) والنعلية (الأحمر الداكن) يظل يسهل التعرف عليها في العينة التي تحصد بسبب وجود خلافات ونها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن العضلات بشكل منفصل على نطاق والدقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم عضلات عموديا، ونصف لتجميد المفاجئة في النيتروجين السائل (لبروتين اللاحقة و / أو استخراج الحمض النووي الريبي)، والنصف الآخر للعلم الأنسجة (أي تقييم المظهرية، immunohistology) تحديد إما في 10٪ من الفورمالين، أو تثبيت المجمدة في نظير البنتان تبرد مع النيتروجين السائل ، كما تريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر من الخطوة 4.3 أعلاه على السيطرة، التي تديرها الأمم المتحدة، جنبا إلى حصاد الساق وعضلات التحكم النعلية. </li></ol>

<ol>
	<li>Fu, S. Y., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributing+factors+to+poor+functional+recovery+after+delayed+nerve+repair:+prolonged+denervation.">Contributing factors to poor functional recovery after delayed nerve repair: prolonged denervation.</a> J. Neurosci. 15, 3886-3895 (1995).</li><li>Kobayashi, J., Mackinnon, S. E., Watanabe, O., Ball, D. J., Gu, X. M., Hunter, D. A., Kuzon, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+duration+of+muscle+denervation+on+functional+recovery+in+the+rat+model.">The effect of duration of muscle denervation on functional recovery in the rat model.</a> Muscle Nerve. 20, 858-866 (1997).</li><li>Bain, J. R., Veltri, K. L., Chamberlain, D., Fahnestock, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+functional+recovery+of+denervated+skeletal+muscle+after+temporary+sensory+nerve+innervation.">Improved functional recovery of denervated skeletal muscle after temporary sensory nerve innervation.</a> Neuroscience. , 103-503 (2001).</li><li>Batt, J., Bain, J., Goncalves, J., Michalski, B., Plant, P., Fahnestock, M., Woodgett, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+gene+expression+profiling+of+short+and+long+term+denervated+muscle.">Differential gene expression profiling of short and long term denervated muscle.</a> FASEB J. 20, 115-117 (2006).</li><li>Sher, J., Cardasis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+fiber+types+in+the+adult+mouse.">Skeletal muscle fiber types in the adult mouse.</a> Acta Neurol. Scand. 54, 45-56 (1976).</li><li>Agbulut, O., Noirez, P., Beaumont, F., Butler-Browne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+heavy+chain+isoforms+in+postnatal+muscle+development+of+mice.">Myosin heavy chain isoforms in postnatal muscle development of mice.</a> Biol. Cell. 95, 399-406 (2003).</li><li>Nagpal, P., Plant, P. J., Correa, J., Bain, A., Takeda, M., Kawabe, H., Rotin, D., Bain, J. R., Batt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ubiquitin+ligase+nedd4-1+participates+in+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy+in+mice.">The ubiquitin ligase nedd4-1 participates in denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice.</a> PLoS ONE. 7, e46427 (2012).</li><li>Plant, P. J., Bain, J. R., Correa, J. E., Woo, M., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+caspase-3+protects+against+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy.">Absence of caspase-3 protects against denervation-induced skeletal muscle atrophy.</a> J. Appl. Physiol. 107, 224-234 (2009).</li><li>Varejao, A. S., Meek, M. F., Ferreira, A. J., Patricio, J. A., Cabrita, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+evaluation+of+peripheral+nerve+regeneration+in+the+rat:+walking+track+analysis.">Functional evaluation of peripheral nerve regeneration in the rat: walking track analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 108, 1-9 (2001).</li><li>Willand, M. P., Holmes, M., Bain, J., Fahnestock, M., de Bruin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+muscle+stimulation+after+immediate+nerve+repair+reduces+muscle+atrophy+without+affecting+reinnervation.">Electrical muscle stimulation after immediate nerve repair reduces muscle atrophy without affecting reinnervation.</a> Muscle Nerve. 48, 219-225 (2013).</li><li>Sterne, G. D., Coulton, G. R., Brown, R. A., Green, C. J., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin-3-enhanced+nerve+regeneration+selectively+improves+recovery+of+muscle+fibers+expressing+myosin+heavy+chains+2b.">Neurotrophin-3-enhanced nerve regeneration selectively improves recovery of muscle fibers expressing myosin heavy chains 2b.</a> J. Cell Biol. 139, 709-715 (1997).</li><li>Plant, P. J., North, M. L., Ward, A., Ward, M., Khanna, N., Correa, J., Scott, J. A., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophic+airway+smooth+muscle+mass+correlates+with+increased+airway+responsiveness+in+a+murine+model+of+asthma.">Hypertrophic airway smooth muscle mass correlates with increased airway responsiveness in a murine model of asthma.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 46, 532-540 (2012).</li><li>Bain, J. R., Mackinnon, S. E., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+evaluation+of+complete+sciatic,+peroneal,+and+posterior+tibial+nerve+lesions+in+the+rat.">Functional evaluation of complete sciatic, peroneal, and posterior tibial nerve lesions in the rat.</a> Plast. Reconstr. Surg. 83, 129-138 (1989).</li><li>Hare, G. M., Evans, P. J., Mackinnon, S. E., Best, T. J., Midha, R., Szalai, J. P., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Walking+track+analysis:+utilization+of+individual+footprint+parameters.">Walking track analysis: utilization of individual footprint parameters.</a> Ann. Plast. Surg. 30, 147-153 (1993).</li><li>McLean, J., Batt, J., Doering, L. C., Rotin, D., Bain, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+rate+of+nerve+regeneration+and+directional+errors+after+sciatic+nerve+injury+in+receptor+protein+tyrosine+phosphatase+sigma+knock-out+mice.">Enhanced rate of nerve regeneration and directional errors after sciatic nerve injury in receptor protein tyrosine phosphatase sigma knock-out mice.</a> J. Neurosci. 22, 5481-5491 (2002).</li><li>Richner, M., Bjerrum, O. J., Nykjaer, A., Vaegter, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spared+nerve+injury+(SNI)+model+of+induced+mechanical+allodynia+in+mice.">The spared nerve injury (SNI) model of induced mechanical allodynia in mice.</a> J. Vis. Exp. (54), e3092 (2011).</li><li>Rogoz, K., Lagerstrom, M. C., Dufour, S., Kullander, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VGLUT2-dependent+glutamatergic+transmission+in+primary+afferents+is+required+for+intact+nociception+in+both+acute+and+persistent+pain+modalities.">VGLUT2-dependent glutamatergic transmission in primary afferents is required for intact nociception in both acute and persistent pain modalities.</a> Pain. 153, 1525-1536 (2012).</li><li>Thornell, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sarcopenic+obesity:+satellite+cells+in+the+aging+muscle.">Sarcopenic obesity: satellite cells in the aging muscle.</a> Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 14, 22-27 (2011).</li></ol>

يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

العصب قصبي نموذج عانى من قطع من إزالة التعصيب التي يسببها الهيكل العظمي ضمور العضلات هو نموذج استخداما والتحقق من صحتها جيدا في الفئران. تكيفنا هذا النموذج للاستخدام في الفئران، والذي يسمح للمحقق للاستفادة من وجود الفئران المعدلة وراثيا ودراسة عملية ضمور العضلات في الجسم الحي في غياب البروتينات حاسما في تنظيم كتلة العضلات 7،8. يمكن للعضلات الساق والنعلية، سواء مزالة العصب في هذا النموذج، يكون بسهولة وبسرعة مع الحد الأدنى من التعامل مع تشريح، وبالتالي توفير ممتازة جودة مرنا والبروتين للالتحليلات الجزيئية لاحقة. وبالمثل، وذلك بسبب حجم العضلات، ويمكن تقسيم، وتوفير أنسجة من نفس الحيوان لإجراء تحاليل نسيجية والمظهرية المصاحبة. إذا كان مطلوبا hindlimb التقييم الوظيفي، والمشي تحليل المسار لا يمكن أن يؤديها متسلسل. وانخفض القدمين في الحبر ومشى الماوس من خلال الضميمة مع ورقة علىأسفل. خصائص مطبوعات يمكن قياسها بشكل موثوق وسجل هدفا لبيان مدى العجز العصبية والعضلية والتوافق مشية، منذ خصائص البصمة تعكس المجموعات العضلية وظيفية 13،14. في حين وضعت أصلا والتحقق من صحتها في الفئران 13، والمشي تحليل المسار ويمكن أيضا أن يؤديها في الفئران 15. عانى من قطع العصب قصبي التسامح هو عموما بشكل جيد للغاية من قبل الفئران. فقط جرعة واحدة من مسكن ضروري في فترة ما بعد الجراحة على الفور. مع استخدام تقنية معقمة المناسبة، وعدوى الأنسجة الرخوة أمر نادر الحدوث. في حين عانى من قطع العصب قصبي لا تحفز مذل الحسي على الجانب الأخمصي للقدم، في منطقتنا C57black6 الخبرة وخروج المغلوب الفئران المعدلة وراثيا أو مشتقة على هذا الخط لا تميل إلى تشوه السيارات. ومع ذلك، يجب أن يتم فحص الفئران يوميا بحثا عن علامات على صناعة السيارات في التشويه، وقرحة الضغط كعب، وكذلك نقطة النهاية الرعاية. بينما لدينا الطرافة وفيات ضئيلةح هذا النموذج، نجد أن حوالي 2-5٪ من الفئران يجب أن يتم التخلص بسبب الإصابة بوساطة النفس، أو قرحة الضغط النامية على، وأطرافه الخلفية تعمل. استخدام الفراش لينة بعد العملية الحاسمة لضمان راحة الحيوان ويساعد على منع تطور قرحة الضغط على الجانب تديرها. ربط العصب الوركي وكذلك نموذج SNI من ربط (حيث و تربط فروع الشظوي الظنبوبي والمشتركة للالوركي، ولكن يتم ترك الربلي سليمة) تكون بمثابة نماذج من آلام الأعصاب 16،17. وبالتالي، يمكن أن آلام جلدية وفرط التألم الحرارية تحدث في القدم في نموذجنا كذلك، ولكن لم نر السلوك الألم علني في الفئران مع النشاط اليومي العادي على فراش ناعم. ومقطوع العصب قصبي من hindlimb واحد فقط ومنذ وزن الفئران تحمل بالتساوي تقريبا على كلا hindlimbs، الجهاز العضلي من طرف المقابل الأمم المتحدة التي تديرها يمكن استخدامها باعتبارها الرقابة الداخلية داخل كل حيوان 7-10.هذا ليس بالضرورة هو الحال في نموذج عانى من قطع الوركي، حيث شذوذ أكثر أهمية من المشي يمكن أن تحدث استجابة الضخامي في عضلة الطرف المقابل. في العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق، ونحن عادة استخدام عضلة الساق والنعلية من الطرف الأمم المتحدة التي تديرها والعضلات سيطرتنا 7،8. إذا اختار المحقق لاستخدام الحيوانات منفصلة عن التي لحصاد عضلة التحكم، ثم جراحة الشام يجب أن يتم تنفيذ. سوف جراحة الشام تتكون من إدارة التخدير، وتقسيم من الجلد لفضح العصب قصبي، ولكن لا عانى من قطع. الجلد وببساطة مغلقة التعرض العصب التالية. في بعض النماذج عانى من قطع الأعصاب الطرفية، عودة التعصيب المخطئين من الجذع الأقرب إلى العضلات المستهدفة يلوث إزالة التعصيب المخطط لها. في هذا النموذج، وتأمين نهاية القريبة من العصب قصبي مقطوع إلى السطح سطحي من العضلة ذات الرأسين الفخذية، وبالتالي إغلاق واجهة العضلات، ومثبطاتTS للعودة التعصيب المخطئين. على هذا النحو، بل هو خطوة حاسمة وأساسية في النموذج. عودة التعصيب المخطئين أمر نادر في هذا النموذج. وبالمثل، معالجة متأنية للعصب أثناء الجراحة أمر ضروري. يجب فصل فروع العصب الربلي والشظوي بلطف من العصب قصبي قبل عانى من قطع عظام الساق، وليس سحقت أو تمدد في هذه العملية. والمعاملة الخشنة من هذه الأعصاب تنازلات وظيفتها، denervating جزئيا الأخرى عضلات hindlimb. إذا حدث هذا سوف تتأثر مشية الحيوان بشكل مختلف مقارنة مع تلك الفئران التي تمر الوحيد عانى من قطع العصب قصبي، وجار العضلات متغير قد تلوث النتائج التجريبية. وبالمثل، يجب توخي الحذر عند تشريح عضلات مزالة العصب. وينبغي التعامل مع العضلات التي كتبها الوتر، وليس اغتنامها مباشرة لتجنب سحق قطعة أثرية من شأنها أن تؤثر على الأنسجة والألياف العضلية التحليلات المظهرية وربما التعبير الجيني. تي نحنتوظيف ypically هذا النموذج في الفئران 20-24 غرام (2-3 أشهر من العمر)، كما أن الحيوان هو نضجا والأعصاب الوركي والظنبوب كلاهما من حجم كاف ليتم التعامل معها بسهولة. ويمكن إجراء الجراحة على الأصغر سنا، حيوانات أصغر حجما إذا رغبت، ولكن العامل المحدد هنا يكون من براعة الجراح التشغيل. قد تكون هذه مشكلة إذا كان مهتما المحقق في دراسة استجابة الخلية القمر الصناعي في العضلات مزالة العصب. يقلل من خلية المحتملة التجدد القمر الصناعي في السن، مقارنة مع الأصغر سنا، 18 الحيوانات، وبالتالي قد تكون هناك حاجة الحيوانات الأصغر سنا في التصميم التجريبي، وتقديم التحدي التقني لمشغل أقل خبرة. يمكن تكييفها العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق من مجرد نموذج من إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات، إلى واحد من عودة التعصيب العضلات المتأخرة (&gt; 4 أسابيع)، إذا رغبت في ذلك، وإذا هم المشغلين ذوي الخبرة الجراحية متوفرة 1،3. بعد فترة من إزالة التعصيب المحدد من قبل الجردestigator، الماوس يمكن reoperated وحشد العصب الشظوي لreinnervate عضلات مزالة العصب. يتم التعرف على الجدعة البعيدة للعصب الظنبوب مقطوع، قلص وحشد العصب الشظوي في نهايته البعيدة وإصلاحه microsurgically إلى جدعة العصب قصبي. سوف العصب الشظوي تنمو بمعدل حوالي 1 ملم / يوم في جدعة العصب قصبي لعضلات الساق reinnervate والنعلية. العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق يوفر ميزة على العصب الوركي نموذج عانى من قطع في ذلك الكسب غير المشروع العصب ليس من الضروري في الإجراء عودة التعصيب 2 بسبب توافر العصب الشظوي. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن reanastomoses العصب يتطلب الدقة من مشغل ذوي الخبرة والمهارة. وباختصار، نحن هنا لشرح العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق في الفئران، لتكون نموذجا سهلة وقوية والتحقق من صحتها بشكل جيد وقابلة للتكرار من إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات والهيكل العظمي. </p&gt;

الهيكل العظمي إزالة التعصيب العضلات، ويرجع ذلك إلى إصابات الأعصاب الطرفية أو المرض أو التدخل الدوائي، والنتائج في خسارة فورية من العضلات وظيفة مقلص الطوعية. العضلات يبدأ بصورة متزامنة إلى ضمور وهذا هو عكسها إذا ضمور في الوقت المناسب، عودة التعصيب ذات النوعية الجيدة يحدث 1،2. في غياب عودة التعصيب، ليف عضلي ضمور تقدم، والتغيرات البيولوجية لا رجعة فيه في العضلات يحدث مع تليف العضلات وفاة ليف عضلي. نحن هنا لشرح نموذج الظنبوب العصب عانى من قطع، وهذا نموذج من إزالة التعصيب التي يسببها الهيكل العظمي ضمور العضلات والتليف، في الفئران. هذا النموذج تمكن العلماء من دراسة الآليات البيولوجية الفسيولوجية الخلوية والجزيئية التي تكمن وراء ضمور العضلات في الجسم الحي في عضلات الساق والنعلية. بينما تاريخيا تستخدم في الغالب في الفئران، وتطبيق أحدث من هذا النموذج لخروج المغلوب وخطوط الماوس المعدلة وراثيا على وجه التحديد، يسمح المحققون إلى تقييم دور بهمبروتين معين (ق) من الفائدة في الاستقراء وتطوير وصيانة، أو بدلا من حل، وضمور العضلات والتليف في الجسم الحي. العصب قصبي هو الأعصاب الطرفية الحركية الحسية مختلطة في hindlimb القوارض، وهي واحدة من فروع محطة الثلاثة للعصب الوركي. عانى من قطع في العصب قصبي denervates في الساق، النعلية والعضلات الأخمصية (وثلاثة صغيرة عضلات المثنية العميقة من القدم بما في ذلك الظنبوبي الخلفي، المثنية الطويلة للأصابع وإبهام اليد المثنية hallicus)، وهو نموذج موحد بشكل جيد والتحقق من صحتها في الفئران 3،4 . عضلات الساق والنعلية يمكن تشريح بسهولة في نقاط زمنية المسلسل إضافة عانى من قطع العصب قصبي، الثابتة وتجهيزها لتقييم الأنسجة في العضلات والألياف العضلية morphometrics، أو فلاش تجميد لاستخراج الحمض النووي الريبي العضلات والبروتين لغرض الدراسة، على سبيل المثال، الشبكات الخلوية مما يشير ضمور العضلات تنظيم. اللوحة الرئيسية GAالعضلات strocnemius هو نوع الألياف المختلطة العضلات (النوع الأول والنوع الثاني، على الرغم من أن معظمها من النوع الثاني)، وتتكون العضلة النعلية من نسبة كبيرة من الألياف أنا نوع، وبالتالي توفير حد سواء بسرعة وبطيئة نشل العضلات لتقييم 5،6. العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق هو مناسبة لدراسة عملية إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات في كل من المدى القصير (أيام) (7) والمدى الطويل (أسابيع إلى أشهر) 4،8. وعلى النقيض من نموذج عانى من قطع العصب الوركي (نموذج الثاني من إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات التي تستخدم عادة في القوارض)، عانى من قطع العصب قصبي يدفع أقل الاعتلال في الحيوان، مما يجعلها نموذجا أكثر جاذبية. عانى من قطع في العصب الوركي denervates جميع عضلات الساق (تحت الركبة) والقدم، وإضعاف قدرة الحيوان للتجول 2، في حين عانى من قطع في العصب قصبي يترك فروع العصب الشظوي والربلي من العصب الوركي سليمة، وبالتالي الحفاظالعضلات المستهدفة والمناطق الحسية. الماوس غير قادر على العطف الأخمصي أو عكس القدم، ولكن قادرة على التجول بسهولة والوزن يتحمل بالتساوي على كل من أطرافه الخلفية، مما يقلل بشكل كبير من معدلات المراضة للنموذج. وقد أجريت دراسات تحليل مشية تقييم أنماط المشي في الفئران بعد اصابات العصب الوركي والظنبوب وإثبات أن البصمة وتحمل الوزن هو الحفاظ بشكل أفضل مع إصابة الظنبوب 9،10. وبالإضافة إلى ذلك، في العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق، يمكن تعبئتها العصب الشظوي في نقطة وقت لاحق ونقل كمصدر للتأخر عودة التعصيب، إذا كان تصميم الدراسة يتطلب 3. في المقابل، تأخر عودة التعصيب في العصب الوركي نموذج عانى من قطع يتطلب استخدام الكسب غير المشروع العصبية إلى العجز العصب الوركي، جدا زيادة كبيرة في صعوبة فنية من طراز والحد من استخدامه إلى الجراحين المهرة. في حين أن العصب قصبي نموذج عانى من قطع Requires إلمام المشغل مع تقنية المنطوق العقيمة في جراحة الحيوان، على حد سواء العصب قصبي وعضلات الساق فإنه يعصب يمكن الوصول إليها بسهولة ومحددة للتلاعب، بحيث الأفراد الذين ليسوا الجراحين، أو من ذوي الخبرة العالية مع جراحة الحيوان، ويمكن السيطرة بسهولة هذا النموذج .

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagents and Materials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 Nylon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2850G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J553G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring microdissecting scissors</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>15021-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra fine forceps</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>11370-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non locking micro needle holder (driver)</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>12076-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring retractor</td>
			<td>Fine Surgical Tools</td>
			<td>17000-02</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tibial nerve transection - a standardized model for denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice

العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق هو جيد التحمل، التحقق من صحة، وقابلة للتكرار نموذج من إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات والهيكل العظمي في القوارض. على الرغم من أن وضعت أصلا وتستخدم على نطاق واسع في الفئران ويرجع ذلك إلى حجم أكبر لها، العصب قصبي في الفئران كبيرة بما يكفي أنه يمكن التلاعب بها بسهولة مع أي سحق أو عانى من قطع، وترك فروع العصب الشظوي والربلي من العصب الوركي سليمة وبالتالي الحفاظ على العضلات المستهدفة. وهكذا، وهذا النموذج يوفر مزايا إحداث أقل معدلات المراضة وعائقا من التمشي من العصب الوركي نموذج عانى من قطع وأيضا يسمح للمحققين لدراسة الآليات البيولوجية الفسيولوجية الخلوية والجزيئية التي تنظم عملية ضمور العضلات في الفئران المعدلة وراثيا. العصب قصبي تمد الساق، النعلية والعضلات الأخمصية، لذلك عانى من قطع في تصاريح دراسة العضلات والهيكل العظمي يتألف من مزالة العصب سريع نشل ألياف نوع الثاني و / أو بطيئة نشل نوع Iالألياف. هنا علينا أن نظهر العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق في الماوس C57Black6. نحن تقييم ضمور في عضلة الساق، كما في عضلة ممثل، في 1 و 2 و 4 أسابيع بعد إزالة التعصيب عن طريق قياس أوزان العضلات ونوع الألياف محددة منطقة مستعرضة على البارافين جزءا لا يتجزأ من أقسام نسيجية immunostained للميوسين السريع نشل.

<html> عانى من قطع العصب قصبي denervates في الساق، النعلية والعضلات الأخمصية من العجل. نحن هنا تقييم تطور ضمور في عضلة الساق، كما في عضلة ممثل. وكان حصاد عضلة الساق 2-3 أشهر من العمر C57Black 6 الفئران (جاكسون المختبرات) مزالة العصب لمدة 1 أو 2 أو 4 أسابيع. الأوزان العضلات تقلل تدريجيا (الشكل 1)، وكذلك منطقة مستعرضة من نوع II بسرعة نشل ألياف العضلات (الشكل 2)، مع مرور الوقت. على الساق هو نوع الألياف المختلطة العضلات (النوع الأول والنوع الثاني)، ولكن إزالة التعصيب يؤدي الى تبديل نوع الألياف من النوع الأول لكتابة ألياف الثاني 11، ونتيجة لذلك عدد كاف من نوع قد لا يكون الأول من الألياف المتوفرة لقياس و التحليل الإحصائي قوية. 50657fig1.jpg &quot;/&gt; الشكل 1. يوضح عضلة الساق مزالة العصب ضمور تدريجي. خضع C57Black 6 الفئران عانى من قطع في العصب قصبي الحق. وكان حصاد عضلة الساق من سيطرة مزالة العصب (يمين) والمقابل (يسار) hindlimbs في 1 أو 2 أو 4 أسابيع بعد عانى من قطع العصب. وتم وزن عضلات الساق، ويتم التعبير عن وزن العضلات مزالة العصب كنسبة من السيطرة على العضلات معصب المقابل. إزالة التعصيب يؤدي الى الفقدان التدريجي لكتلة العضلات. <img alt="الشكل 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50657/50657fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50657/50657fig2.jpg" /> الشكل 2. يوضح عضلة الساق مزالة العصب الانخفاض التدريجي في ليف عضلي منطقة المقطع العرضي هي: (أ) مزالة العصب والعضلات مراقبة الساق الثابتة الفورمالين، وقطع على المقطع العرضي في musclالمقطع منتصف الإلكترونية وimmunostained لمكافحة الهيكل العظمي الميوسين العضلات وسريعة نشل الإسوي (بلادي-32، سيغما، 1:500 تمييع) تليها الضد الثانوية البيروكسيديز وstreptavidin-HRP/DAB كما هو موضح 7. تم استخدام الهيماتوكسيلين باعتبارها مباين. سريع نشل ألياف نوع II وصمة عار البني وبطيئة نشل نوع الأول من الألياف وصمة عار الأرجواني ضوء. تم قياس مساحة المقطع العرضي (CSA) من الألياف باستخدام برنامج ImageJ (بيثيسدا، NIH) كما هو موضح 7،12. نوع نشل الألياف السريعة II تظهر ضمور تدريجي. عدد قليل جدا من نوع الأول من الألياف موجودة في الساق مزالة العصب للسماح بتقييم صحيحة إحصائيا من حجم الألياف. (ن = 6-9 الفئران / المجموعة تم قياس ما لا يقل عن 200 myofibers في العضلات من قبل المعلقين أعمى إلى النمط الظاهري المنطوق البيانات يتم عرض كما يعني + / -. يساوي شريط SD مقياس 100 ميكرون). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/50657/50657fig1large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر الرقم</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice at JoVE.com

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق هو جيد التحمل، التحقق من صحة، وقابلة للتكرار نموذج من ضمور العضلات والهيكل العظمي. يوصف بروتوكول الجراحية نموذج وتظاهر في C57Black6 الفئران.

الظنبوب عانى من قطع العصب - نموذج موحد لإزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات الهيكلية في الفئران

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

tibial-nerve-transection-standardized-model-for-denervation-induced

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

24.3K Views.  St Michaels Hospital.  العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق هو جيد التحمل، التحقق من صحة، وقابلة للتكرار نموذج من ضمور العضلات والهيكل العظمي. يوصف بروتوكول الجراحية نموذج وتظاهر في C57Black6 الفئران. 

Video: Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

ميو الميكانيكية وتحليل الهيكل العظمي والعضلات المعزولة

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared nerve injury (SNI) model induces symptoms of neuropathic pain such as mechanical allodynia i.e. pain due to tactile stimuli that do not normally provoke a painful response [1]. 
The SNI mouse model involves ligation of two of the three branches of the sciatic nerve (the tibial nerve and the common peroneal nerve), while the sural nerve is left intact [2]. The lesion results in marked hypersensitivity in the lateral area of the paw, which is innervated by the spared sural nerve. The non-operated side of the mouse can be used as a control. The advantages of the SNI model are the robustness of the response and that it doesn&#x2019;t require expert microsurgical skills.
The threshold for mechanical pain response is determined by testing with von Frey filaments of increasing bending force, which are repetitively pressed against the lateral area of the paw [3], [4]. A positive pain reaction is defined as sudden paw withdrawal, flinching and/or paw licking induced by the filament. A positive response in three out of five repetitive stimuli is defined as the pain threshold. 
As demonstrated in the video protocol, C57BL/6 mice experience profound allodynia as early as the day following surgery and maintain this for several weeks.

The Spared Nerve Injury SNI Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

The Spared Nerve Injury animal model is described here as a mouse model of peripheral neuropathic pain following partial denervation of the sciatic nerve by lesioning the tibial and common peroneal nerve branches, leaving the remaining sural nerve intact. Behavioral modification resulting from mechanical allodynia is quantified by von Frey filaments.

وإصابة العصب تنج (SNI) موديل Allodynia الميكانيكية المستحثة في الفئران

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared ...

Skeletal Muscle Gender Dimorphism from Proteomics

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably adaptable to environmental factors1 such as hypertrophy by resistance exercise and atrophy by disuse. It thereby exhibits remodeling and adaptations to stressors (heat, ischemia, heavy metals, etc.)2,3. Damage can occur to muscle by a muscle exerting force while lengthening, the so-called eccentric contraction4. The contractile proteins can be damaged in such exertions and need to be repaired, degraded and/or resynthesized; these functions are not part of the contractile proteins, but of other much less abundant proteins in the cell. To determine what subset of proteins is involved in the amelioration of this type of damage, a global proteome must be established prior to exercise5 and then followed subsequent to the exercise to determine the differential protein expression and thereby highlight candidate proteins in the adaptations to damage and its repair. Furthermore, most studies of skeletal muscle have been conducted on the male of the species and hence may not be representative of female muscle. 
In this article we present a method for extracting proteins reproducibly from male and female muscles, and separating them by two-dimensional gel electrophoresis followed by high resolution digital imaging6. This provides a protocol for spots (and subsequently identified proteins) that show a statistically significant (p &lt; 0.05) two-fold increase or decrease, appear or disappear from the control state. These are then excised, digested with trypsin and separated by high-pressure liquid chromatography coupled to a mass spectrometer (LC/MS) for protein identification (LC/MS/MS)5. This methodology (Figure 1) can be used on many tissues with little to no modification (liver, brain, heart etc.).

A straight-forward set of methods to isolate and determine the identity of the most abundant proteins expressed in skeletal muscle. About 800 spots are discerned on a two-dimensional gel from 10 mg muscle; this allows for the determination of gender-specific protein expression. These methods will give equivalent results in most tissues.

الهيكل العظمي مثنوية الشكل الجنس العضلات من البروتين

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably ...

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in injured sensory neurons and along the entire nociceptive pathway within the central nervous system. It is usually chronic and challenging to treat. In order to study neuropathic pain and its treatments, different models have been developed in rodents. These models derive from known etiologies, thus reproducing peripheral nerve injuries, central injuries, and metabolic-, infectious- or chemotherapy-related neuropathies. Murine models of peripheral nerve injury often target the sciatic nerve which is easy to access and allows nociceptive tests on the hind paw. These models rely on a compression and/or a section. Here, the detailed surgery procedure for the &#34;cuff model&#34; of neuropathic pain in mice is described. In this model, a cuff of PE-20 polyethylene tubing of standardized length (2 mm) is unilaterally implanted around the main branch of the sciatic nerve. It induces a long-lasting mechanical allodynia, i.e., a nociceptive response to a normally non-nociceptive stimulus that can be evaluated by using von Frey filaments. Besides the detailed surgery and testing procedures, the interest of this model for the study of neuropathic pain mechanism, for the study of neuropathic pain sensory and anxiodepressive aspects, and for the study of neuropathic pain treatments are also discussed.

Neuropathic pain is a consequence of a lesion or disease affecting the somatosensory system. The &#8220;cuff model&#8221; of neuropathic pain in mice consists of the implantation of a polyethylene cuff around the main branch of the sciatic nerve. Mechanical allodynia is tested using von Frey filaments.

العصب الوركي استكفاف نموذج من ألم الأعصاب في الفئران

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly effective. This video describes the percutaneous biopsy technique using a modified Bergstr&#246;m needle to obtain skeletal muscle tissue samples from the vastus lateralis of human subjects. The Bergstr&#246;m needle consists of an outer cannula with a small opening (&#8216;window&#8217;) at the side of the tip and an inner trocar with a cutting blade at the distal end. Under local anesthesia and aseptic conditions, the needle is advanced into the skeletal muscle through an incision in the skin, subcutaneous tissue, and fascia. Next, suction is applied to the inner trocar, the outer trocar is pulled back, skeletal muscle tissue is drawn into the window of the outer cannula by the suction, and the inner trocar is rapidly closed, thus cutting or clipping the skeletal muscle tissue sample. The needle is rotated 90&#176;&#160;and another cut is made. This process may be repeated three more times. This multiple cutting technique typically produces a sample of 100-200 mg or more in healthy subjects and can be done immediately before, during, and after a bout of exercise or other intervention. Following post-biopsy dressing of the incision site, subjects typically resume their activities of daily living right away and can fully participate in vigorous physical activity within 48-72 hr. Subjects should avoid heavy resistance exercise for 48 hr to reduce the risk of herniation of the muscle through the incision in the fascia.

The purpose of this video is to present the modified Bergstr&#246;m skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

الهيكل العظمي إجراءات خزعة العضلات البشرية باستخدام تقنية التعديل بيرجستروم

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

بسيطة الحرجة الحجم فخذي عيب النموذجي في الفئران

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and either cut or crush it to induce peripheral nerve injury. Advantages of this surgery are its simplicity, high reproducibility, and the lack of effect on vital functions or mobility from the subsequent facial paralysis, thus resulting in a relatively mild surgical outcome compared to other nerve injury models. A major advantage of using a cranial nerve injury model is that the motoneurons reside in a relatively homogenous population in the facial motor nucleus in the pons, simplifying the study of the motoneuron cell bodies. Because of the symmetrical nature of facial nerve innervation and the lack of crosstalk between the facial motor nuclei, the operation can be performed unilaterally with the unaxotomized side serving as a paired internal control. A variety of analyses can be performed postoperatively to assess the physiologic response, details of which are beyond the scope of this article. For example, recovery of muscle function can serve as a behavioral marker for reinnervation, or the motoneurons can be quantified to measure cell survival. Additionally, the motoneurons can be accurately captured using laser microdissection for molecular analysis. Because the facial nerve axotomy is minimally invasive and well tolerated, it can be utilized on a wide variety of genetically modified mice. Also, this surgery model can be used to analyze the effectiveness of peripheral nerve injury treatments. Facial nerve injury provides a means for investigating not only motoneurons, but also the responses of the central and peripheral glial microenvironment, immune system, and target musculature. The facial nerve injury model is a widely accepted peripheral nerve injury model that serves as a powerful tool for studying nerve injury and regeneration.

We present a surgical protocol detailing how to perform a cut or crush axotomy on the facial nerve in the mouse. The facial nerve axotomy can be employed to study the physiological response to nerve injury and test therapeutic techniques.

الوجه Axotomy العصب في الفئران: نموذج لدراسة الاستجابة العصبون الحركي للإصابة

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow reserve (CFR) in humans. Reduced CFR is accompanied by marked intramyocardial and pericoronary fibrosis and is used as an indication of the severity of dysfunction. This study explores, step-by-step, the real-time changes measured in the coronary flow velocity, CFR and systolic to diastolic peak velocity (S/D) ratio in the setting of an aortic banding model in mice. By using a Doppler transthoracic imaging technique that yields reproducible and reliable data, the method assesses changes in flow in the septal coronary artery (SCA), for a period of over two weeks in mice, that previously either underwent aortic banding or thoracotomy. 
During imaging, hyperemia in all mice was induced by isoflurane, an anesthetic that increased coronary flow velocity when compared with resting flow. All images were acquired by a single imager. Two ratios, (1) CFR, the ratio between hyperemic and baseline flow velocities, and (2) systolic (S) to diastolic (D) flow were determined, using a proprietary software and by two independent observers. Importantly, the observed changes in coronary flow preceded LV dysfunction as evidenced by normal LV mass and fractional shortening (FS). 
The method was benchmarked against the current gold standard of coronary assessment, histopathology. The latter technique showed clear pathologic changes in the coronary artery in the form of peri-coronary fibrosis that correlated to the flow changes as assessed by echocardiography. 
The study underscores the value of using a non-invasive technique to monitor coronary circulation in mouse hearts. The method minimizes redundant use of research animals and demonstrates that advanced ultrasound-based indices, such as CFR and S/D ratios, can serve as viable diagnostic tools in a variety of investigational protocols including drug studies and the study of genetically modified strains.

Coronary flow reserve (CFR) is useful for assessment of myocardial oxygen demand and evaluation of cardiovascular risk. This study establishes a step-by-step transthoracic Doppler echocardiographic (TTDE) method for longitudinal monitoring of the changes in CFR, as measured from coronary artery in mice, under the experimental pressure overload of aortic banding.

تقييم الموجات فوق الصوتية وبناء من الشريان التاجي تدفق وتدفق التاجي الاحتياطي باستخدام نموذج الزائد الضغط في الفئران

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and well tolerated technique. The Weil-Blakesley conchotome has a sharp biting tip with a 4 - 6 mm wide hollow. It is inserted through a 5 - 10 mm skin incision and can be maneuvered for controlled tissue penetration. The tip is opened and closed within the tissue and then rotated through 90 -180&#176; to cut the muscle. The amount of muscle obtained following repeated sampling can vary from 20 mg to 290 mg which can be processed for both histology and molecular studies. The wound needs to be kept dry and vigorous physical activity kept to a minimum for approximately 72 hr although normal levels of activity can restart immediately following the procedure. This procedure is safe and effective when close attention is paid to the selection of subjects, full asepsis and post procedure care. &#160;Both right and left vastus lateralis are suitable for biopsy dependent on participant preference.

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

This video demonstrates the technique of percutaneous muscle biopsy of the human vastus lateralis using the Weil-Blakesley conchotome.

الانسان<em&gt; المتسعة الوحشية</em&gt; الهيكل العظمي خزعة العضلات باستخدام ويل Blakesley مبضع المحارات

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Surgical Angiogenesis in Porcine Tibial Allotransplantation: A New Large Animal Bone Vascularized Composite Allotransplantation Model

Segmental bone loss resulting from trauma, infection malignancy and congenital anomaly remains a major reconstructive challenge. Current therapeutic options have significant risk of failure and substantial morbidity.
Use of bone vascularized composite allotransplantation (VCA) would offer both a close match of resected bone size and shape and the healing and remodeling potential of living bone. At present, life-long drug immunosuppression (IS) is required. Organ toxicity, opportunistic infection and neoplasm risks are of concern to treat such non-lethal indications.
We have previously demonstrated that bone and joint VCA viability may be maintained in rats and rabbits without the need of long-term-immunosuppression by implantation of recipient derived vessels within the VCA. It generates an autogenous, neoangiogenic circulation with measurable flow and active bone remodeling, requiring only 2 weeks of IS. As small animals differ from man substantially in anatomy, bone physiology and immunology, we have developed a porcine bone VCA model to evaluate this technique before clinical application is undertaken. Miniature swine are currently widely used for allotransplantation research, given their immunologic, anatomic, physiologic and size similarities to man. Here, we describe a new porcine orthotopic tibial bone VCA model to test the role of autogenous surgical angiogenesis to maintain VCA viability.
The model reconstructs segmental tibial bone defects using size- and shape-matched allogeneic tibial bone segments, transplanted across a major swine leukocyte antigen (SLA) mismatch in Yucatan miniature swine. Nutrient vessel repair and implantation of recipient derived autogenous vessels into the medullary canal of allogeneic tibial bone segments is performed in combination with simultaneous short-term IS. This permits a neoangiogenic autogenous circulation to develop from the implanted tissue, maintaining flow through the allogeneic nutrient vessels for a short time. Once established, the new autogenous circulation maintains bone viability following cessation of drug therapy and subsequent nutrient vessel thrombosis.

Currently any kind of vascularized composite allotransplantation depends on long-term-immunosuppression, difficult to support for non-life-critical indications. We present a new porcine tibial VCA model that can be used to study bone VCA and demonstrate the use of surgical angiogenesis to maintain bone viability without the need of long-term immune-modulation.

الأوعية الجراحية في اللوترانسبلانتيشن قصبي الخنزير: Vascularized العظام حيوانية كبيرة جديدة نموذج مركب اللوترانسبلانتيشن

Segmental bone loss resulting from trauma, infection malignancy and congenital anomaly remains a major reconstructive challenge. Current therapeutic ...